乙型肝炎病毒基因型与临床的相关性研究
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【摘要】目的 分析乙型肝炎病毒基因分型与临床的相关性。方法 随机选择山东地区HBV-DNA阳性患者249例,其中无症状携带者(ASC)53例,慢性活动性肝炎(CAH)126例,肝硬化(LC)38例,重型肝炎(FHF)32例。用型特异性引物巢式PCR快速检测HBV基因型。结果 C基因型124例(49.8%),B基因型84例(33.7%),B+C混合基因型41例(16.5%)。C基因型在活动性肝病(CAH、LC、FHF)中占优势,而ASC组则是以B基因型为主,差异有显著性(P<0.01)。CAH组患者不同基因型的基本特征:C基因型及B+C基因型感染者ALT水平及HBV-DNA定量均显著高于B基因型组(P0.05);B基因型组中HBV-DNA定量及ALT水平均较C基因型组为低,具有显著性差异(P<0.01)。HBeAg阳性率与性别、年龄及基因型的关系:三组基因型之间HBeAg阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=9.28,P=0.0098),经χ2分割比较:发现C基因型组HBeAg阳性率高于其他两组(P<0.01);各组不同性别之间HBeAg阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05);HBeAg阳性率有随年龄增长而降低的趋势,经趋势检验,除B基因型女性和B+C基因型女性两组人数较少,未得到有统计学意义的结果外,其余7组均有统计学意义。结论 在ASC中,以B基因型为优势基因,而在活动性肝病(包括慢性活动性肝炎、肝硬化、重型肝炎)中,以C基因型为多见,提示基因型与疾病活动性可能存在一定的关系。
【关键词】乙型肝炎病毒;基因型;临床
【中图分类号】R512.6+2
【文献标识码】A
【文章编号】1814-8824(2009)-09-0022-03
乙型肝炎病毒(HBV)感染是一全球性健康问题,感染后既可表现为急性或暴发性肝炎,也可表现为各种慢性感染,如无症状携带者、慢性肝炎、肝硬化、肝细胞肝癌。HBV感染的肝损害主要由免疫机制所介导,而影响免疫应答的因素有感染时的年龄、个体的遗传素质和病毒的基因变异,后者影响病毒抗原的表达。当前, 基于全核苷酸序列比较,可分成8 种不同的A~H基因型,应用HBV基因分型,研究其不同的临床特点,我们对249例慢性HBV-DNA阳性者进行基因分型,分析其与临床的相关性。
1 对象与方法
1.1 标本来源 249例慢性HBV-DNA阳性者均为门诊和住院病人,男186例,女63例,平均年龄(33.8±14.6)岁,其中无症状携带者(ASC)53例,慢性肝炎(CAH)126例,肝硬化(LC)38例,重型肝炎(FHF)32例,所有病例均为山东省当地汉族居民,诊断均符合2000年全国病毒性肝炎会议制定的标准。通过适当的临床和实验室方法排除所有引起慢性肝病的其他因素,如HCV感染、自身免疫性肝炎、酒精性肝炎和代谢失调等。
1.2 血清学检验 血清用来检测肝功能、乙肝五项病毒学指标(HBsAg、抗- HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)及HBV-DNA,剩余血清在-70℃保存备用。肝功能测定:将样本进行3000转/min分离血清,然后取血清直接用Beckman全自动生化分析仪测定。乙肝五项指标的测定:采用双夹心ELISA法,试剂盒购自厦门泰伦生物工程有限公司,仪器为美国DENLEY自动酶标洗板机、BIORAD450型酶标仪。HBV-DNA定量:采用荧光定量PCR法,试剂盒由中山医科大学达安基因诊断中心提供。PCR扩增仪为美国PE5700全自动分析仪。
1.3 HBV基因分型 先通过外引物进行第一轮PCR,然后,将6对型特异性引物分到两个反应体系(MixA和MixB)中分别对第一轮扩增产物进行第二轮PCR,根据阳性结果判断出样本的基因型。
1.4 统计学分析 组间均数比较用t检验,率的比较用χ2检验,不同基因型HBV感染CAH的基本特征比较用q检验,HBeAg阳性率与性别、年龄及基因型的关系用χ2检验、χ2分割检验和趋势检验,P<0.05具有统计学意义。所有数据均通过电脑用SPSS10.0进行统计处理。
2 结果
2.1 慢性HBV感染者的基因型分布 249例HBV-DNA阳性感染者,男186例,女63例,其中ASC 53例,CH 126例,LC 38例,FHF 32例,B基因型 84 例(33.7%), C基因型 124例(49.8%),B+C基因型41例(16.5%),未发现其他基因型的存在。ASC组以B基因型为主,而C基因型则在活动性肝病(CAH、LC、FHF)中占优势,差异有显著性(P<0.05)。(表1)。
2.2 CAH组患者不同基因型的基本特征 C基因型及B+C基因型感染者ALT水平及HBV-DNA定量均显著高于B基因型组(P<0.01),不同基因型组间,年龄、性别无显著性差异(P>0.05)。B基因型组中HBV-DNA定量及ALT水平均较C基因型组为低,具有显著性差异(P<0.01)(表2)。
2.3 HBeAg阳性率与性别、年龄及基因型的关系 三组基因型之间HBeAg阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=9.28,P=0.0098),经χ2分割比较:发现C基因型组HBeAg阳性率高于其它两组(P<0.01)。各组不同性别之间HBeAg阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。HBeAg阳性率有随年龄增长而降低的趋势,经趋势检验,除B基因型女性和B+C基因型女性两组人数较少,未得到有统计学意义的结果外,其余7组均有统计学意义(见表3)。
从表中可以看出,在 ASC组中,不同基因型分布差异有显著性(χ2=12.491,P=0.002),以B基因型为主;在活动性肝病中,不同基因型间差异有显著性,均以C基因型为主,其中,CAH组:χ2=19.241,P=0.0001;LC组:χ2=6.368,P=0.041;FHF组:χ2=6.063,P=0.048;在B基因型组,各不同临床类型间差异有显著性(χ2=18.11,P=0.0001);在C基因型组,各不同临床类型间差异有显著性(χ2=24.353,P=0.0001);在B+C基因型组,不同临床类型间差异无显著性(χ2=4.22,P=0.238)
*经两两比较q检验:B基因型的ALTs水平低于C基因型,P<0.01,其余组间比较无统计学意义
** 经两两比较q检验:HBV-DNA(对数值)三组之间差异均有统计学意义,P<0.01
3 讨论
乙型肝炎是严重威胁人类健康的、发病率很高的传染病,对乙肝病毒(HBV)的研究虽然取得了很大进展,但是目前仍然没有非常有效的办法,随着HBV基因型概念的提出,乙肝的研究进入了一个新的阶段。HBV的基因型存在一定的地区分布特征,并可能与疾病的进展有一定的关联[1]。
本研究发现山东地区以C基因型(48 ......
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