HPLC法测定胃炎Ⅰ号胶囊中芍药苷的含量
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作者简介：
于兆云，男，(1971.03-)，甘肃金昌人，金川集团公司职工医院药剂科主管药师
【摘要】目的：建立用HPLC法测定胃炎Ⅰ号胶囊中芍药苷含量的方法。方法：色谱柱为kromasil C18分析柱(250mm×4.6mm，5um)；流动相为乙腈-水(15：85)；流速1.0mL.min-1；检测波长232nm。结果：芍药苷的进样量在0.02~0.12mg/mL范围内，与其峰面积有良好的线性关系(r=0.9994)，加样回收率为99.23%，RSD为0.85%(n=5)。结论：本方法效果良好，专一性强，稳定性和重现性好，可作为该制剂定量质控的方法。
【关键词】胃炎Ⅰ号胶囊；芍药苷；高效液相色谱法
慢性胃炎是指胃粘膜慢性炎性病变。慢性胃炎的特征是胃粘膜反复慢性炎症，胃腺萎缩减少，粘膜层呈特异再生性改变。临床表现以胃粘膜炎症及胃腺萎缩的病理生理为基础，发病率在消化系统疾病中列居首位[1]，且随年龄增长而增长。目前西药疗效不甚理想。胃炎Ⅰ号胶囊是根据中医药理论，在我院多年验方的基础上自行研究开发的纯中药复方制剂，对慢性胃炎、慢性浅表性胃炎、胃及十二肠溃疡等病，经临床应用效果明显。经小鼠急性毒性试验表明该药毒性小，临床用药安全。经我院药效学研究和临床观察证明，该药抗炎作用显著，且有抑制胃酸分泌、舒肝理气、镇痛等功效。
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为了有效地控制其质量，我们采用HPLC法测定制剂中的芍药苷的含量。方法效果良好，专一性强，稳定性和重现性好，可作为该制剂定量质控的方法。
1 仪器与试药
岛津CBM-10A高效液相色谱仪，包括SPD-10A紫外检测器、LC-10AT二元高压泵、CTO-10AS柱温箱、LCsolution Lite工作站(日本Shimadzu公司)；AE240S型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。
芍药苷对照品(HPLC级，上海源叶生物科技有限公司，批号：20100912)；甲醇为色谱纯；水为双蒸水；其余试剂均为分析纯；胃炎Ⅰ号胶囊为我院自制。
2 方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：WondaSil Cl8柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇-水(30：70)；流速：1.0mL .min-1；柱温：30℃；检测波长：230nm。
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2.2线性关系考察
分别精密量取对照品溶液(0.2mg/mL)1，2，3，4，5，6mL，装入10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，分别吸取20μL注入液相色谱仪中，测定峰面积Y，将峰面积Y与芍药苷浓度X进行线性回归得回归方程Y=24.02×105X-21.41×102，r=0.9994，芍药苷浓度在0.02~0.12mg/mL范围内与峰面积有良好的线性关系。
2.3精密度试验
取对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样5次，每次进样20μL，测定峰面积，结果RSD=0.96%(n=5)，见表1。
表1 精密度试验结果(n=5)
Tab 1 Results of precision test (n=5)
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2.4稳定性试验
取供品溶液，按上述色谱条件，分别于0，0.5，2，4，6，8h进样，测定峰面积，结果RSD=1.01%(n=5)，显示待测样品至少在8h内稳定，见表2。
表2 稳定性考察结果(n=5)
Tab 1 Results of stability test (n=5)
2.5供试品制备方法的选择
白芍、赤勺中芍药苷的提取方法主要有醇提和水提两种，但因超声处理时间及次数不同，芍药苷与其他杂质峰的分离度不很理想，故对本品分别进行醇提与水提处理。结果显示，水提超声处理45min再过聚酰胺柱分离效果最好。
2.6阴性对照试验
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取缺白芍、赤芍样品，按供试品溶液制备方法制备，并取适量注入液相色谱仪，结果显示在芍药苷相同保留时间处无吸收峰。对照品、样品及阴性对照品色谱图见图1
图1对照品、样品及阴性对照品色谱图
A. 对照品；B. 阴性样品；C.样品
Fig 1 HPLC chromatogram
A. reference substance; B. negative sample; C. sample
2.7重现性试验
取同一批样品5份，分别精密称定，按样品含量测定方法测定峰面积并计算芍药苷含量(mg.g-1)。结果平均含量为5.7130mg/g，RSD=0.92%，见表3。
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表3 重现性试验结果 (n=5)
Tab 3 Results of repeatability test (n=5)
2.8回收率试验
精密称定已知含量样品5份，精密加入芍药苷对照品适量，按样品含量测定方法测定峰面积并计算含量。结果显示平均回收率为99.23%，RSD=0.85%(见表4)。
表4 回收率试验结果 (n=5)
Tab 4 Results of recovery test (n=5)
2.9样品含量测定
取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水50mL，超声处理，过滤，滤液离心，精密吸取上清液10mL加入已充填好的聚酰胺柱，用水洗脱，收集洗脱液60mL，水浴蒸干，加稀乙醇溶解，转移至5mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45um)滤过，作为供试品溶液；另精密称取芍药苷对照品适量，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，制成每1mL中含0.086mg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪中，测定。样品每粒胶囊含芍药苷，不得少于1mg，结果见表6。
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表5 样品含量测定结果
Tab 5 Content determination of sample pills
3 讨论
3.1有报道用薄层扫描色谱法测定芍药苷的含量[2]，但用HPLC法简便、准确、稳定性好。
3.2芍药苷的提取方法主要有醇提和水提两种，通过试验发现，醇提后的色谱图中始终有与芍药苷无法分离的杂质峰，水提时芍药苷与杂质峰分离较好。
用HPLC法测定胃炎Ⅰ号胶囊中芍药苷的含量，分离效果好、精密度高、专一性强、稳定性和重现性良好，可作为该制剂定性及定量控制方法。
参考文献
[1] 王世成, 主编.《内科学》.上海:上海科学技术出版社,1996:177-181.
[2] 钟瑞建, 叶久之, 喻俞俊. 胃炎康胶囊质量标准研究. 中草药, 2000，31(2): 104-105., 百拇医药(于兆云 佟婉红 李钦)