流式细胞术检测胃癌中血管内皮生长因子的表达及意义
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【摘要】 目的： 应用流式细胞术检测胃癌中血管内皮生长因子(VEGF)的表达，探讨其在胃癌发生、发展及转移中的作用。方法：应用流式细胞术检测56例胃癌标本中VEGF的表达。结果：VEGF在胃癌组织中的表达量明显高于正常胃粘膜组织，不同浸润深度、有无淋巴结转移的胃癌组织之间VEGF表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论：胃癌VEGF高表达，其可能是判断病人预后的指标。
【关键词】 胃癌；血管内皮生长因子；流式细胞术
胃癌是消化道常见的肿瘤，在我国发病率较高。血管内皮生长因子(VEGF) 是肿瘤血管生成过程中的关键因子[1]，促血管生成作用最强，特异性最高。本实验通过流式细胞术半定量检测VEGF在胃癌组织及正常胃粘膜组织中的表达情况，探讨其与胃癌临床病理特征的关系。
1材料和方法
1.1材料
收集2003年6月~2004年6月胃癌根治手术切除后预留的新鲜标本56例，年龄为32~74岁，平均年龄56.3岁，其中男性33例，女性23例。有淋巴结转移患者30例，无淋巴结转移患者26例。选取病理证实为正常胃粘膜组织15例作为对照。
1.2 VEGF蛋白表达的检测
将70%酒精固定的新鲜组织放在不锈钢网上，下置一平皿，用眼科剪刀将组织剪碎，用眼科镊子轻搓组织块，直至将组织搓完为止。将平皿中的混悬液用铜网过滤去除细胞团块，收集细胞悬液，离心沉淀。取单细胞悬液1×106/ml，加入VEGF工作液0.1ml，室温孵育30分钟，加入PBS 10ml洗涤，弃上清，加入FITC-IgG二抗工作液100μl，避光室温孵育30分钟，加入PBS 10ml离心，弃上清以除去未结合的荧光二抗，加入PBS 0.1ml，经500目铜网过滤后上机检测[2]。设有PBS代替一抗和二抗的阴性对照，以及只加一抗或二抗的阳性对照。采用美国Beckman Coulter公司生产的流式细胞仪检测。
1.3结果判定标准
以荧光指数(fluorescence index, FI)表示VEGF表达的相对含量。FI值计算公式为：
1.4统计学方法
实验数据均以
均数±标准差(x±s)表示，所有数据结果经Excel表格整理，应用SAS统计软件进行统计分析，两组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1VEGF在胃癌组织、正常胃粘膜组织的表达：
VEGF在56例胃癌的表达量为1.34±0.24，而在15例正常胃粘膜组织的表达量为1.00±0.15，经统计学分析，二组差异有统计学意义(P<0.01)，即胃癌组VEGF表达增高。见表1。
表1 VEGF在胃癌与正常胃粘膜组织的表达
2.2VEGF的表达与胃癌临床病理特征的关系：
胃癌中VEGF在33例未侵及浆膜组中的表达量为1.29±0.19，在23例侵及浆膜及浆膜以外组的表达量为1.42±0.25，二者比较差异有统计学意义；在30例有淋巴结转移病例中，VEGF的表达量为1.42±0.20，在26例无淋巴结转移病例中，VEGF的表达量为1.25±0.26，二者比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表2；但是，VEGF在不同年龄、不同性别、不同肿瘤直径分组的表达中差异无明显统计学意义(P>0.05)。
表2VEGF的表达与胃癌临床病理特征的关系
3讨论
自从20世纪70年代初，Folkman等[3]提出肿瘤生长依赖于血管生成的概念以来，关于血管生成与肿瘤的关系引起了很多学者的高度重视。研究证明，肿瘤的生长有赖于血管的生成，血管增生的程度反映了肿瘤生成的能力，从而在一定程度上决定了肿瘤的生物学行为。当肿瘤增至1~2mm3时，肿瘤已不能单纯依靠弥散作用获取所需的氧及营养物质，如果无新生血管长入，肿瘤将保持休眠状态或者发生退化。当有新生血管长入肿瘤组织，则肿瘤会呈迅速生长，且肿瘤细胞可侵入血管或淋巴管，发生转移。基于此，人们寻找促使血管生成的各种相关因素。VEGF最初称为血管通透因子，是在豚鼠肿瘤腹腔渗液中及肿瘤细胞培养上清液中发现的使血管通透性升高的因子，后来有学者命名为VEGF。VEGF是由2条相对分子量为23000单链组成的同一蛋白质，人VEGF基因位于染色体6p21.3，全长14KB，由8个外显子，7个内含子组成，它是目前研究最多的促血管生成因子，对肿瘤血管生成及肿瘤生物学行为有重要影响。
本实验应用流式细胞术半定量检测胃癌及正常胃粘膜中VEGF的表达，观察到VEGF在胃癌中的表达明显高于正常胃粘膜组织中的表达；胃癌组中观察到侵犯到浆膜及浆膜以外组的VEGF表达量明显高于未侵及浆膜组，在有淋巴结转移组VEGF的表达量明显高于无淋巴结转移组，由于这两个特征是与胃癌患者预后相关的因素，提示其表达可能与肿瘤的生物学行为及患者的预后相关。VEGF在肿瘤内及肿瘤周围可诱导新生血管形成，并通过增加血管通透性而有利于肿瘤细胞侵入血管，增强癌的转移能力[4]，肿瘤患者转移能力的增强使其预后更差。
总之，流式细胞术检测胃癌中VEGF高表达与预后有关。通过实验也得到一条思路，特异性药物针对VEGF阳性细胞治疗，可能会成为治疗胃癌新的靶点。
参考文献 ......
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