土鳖虫多肽溶液抗肿瘤作用研究(1)
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【摘要】 目的：研究土鳖虫多肽溶液抗肿瘤作用。方法：以H22肿瘤小鼠为动物模型，给药10天后处死，取肿瘤、脾脏、胸腺并称重，计算抑瘤率、脾脏系数和胸腺系数；取肝脏检测MDA水平和SOD活性。结果：土鳖虫多肽溶液对H22肿瘤小鼠的抑瘤率为46.79%，脾脏系数和胸腺系数均较模型对照组升高(P <0.05)；土鳖虫多肽能使肿瘤小鼠肝脏MDA水平降低和SOD活性升高，与模型组比较有差异(P <0.05)。结论：土鳖虫多肽溶液对H22肿瘤小鼠有抗肿瘤作用。
【关键词】 土鳖虫；多肽；抗肿瘤
anti-tumor effect of Eupolyphage sinensis Walker polypeptide solution
Li XingnuanYu HuanQin Zhongjun
(College of Medical, Jiujiang University, Jiujiang, 332000)
【Abstract】Abjective To study the anti-tumor effect of Eupolyphage sinensis Walker polypeptide solution. Methods The tumor model in mice was established by line of H22 liver cancer. After 10 days of treatment, the mice were killed, the subcutaneous sarcoma, spleen and thymus were separated and weight; The MDA level and SOD activity of liver were tested. Results The inhibition rate of Eupolyphage sinensis Walker polypeptide solution on H22-Hepatoma bearing mice was 46.79%；The spleen index and thymus index were higher than model control group(P <0.05); The MAD level was decreased and SOD activity was raised of liver than model control group(P <0.05). Conclusion Eupolyphage sinensis Walker polypeptide solution has anti-tumor effect on H22-Hepatoma bearing mice.
【Key words】Eupolyphage sinensis Walker；polypeptide；anti-tumor
土鳖虫(Eupolyphage sinensis Walker ), 又名土元，属节肢动物门昆虫纲蜚蠊目鳖蠊科昆虫，为《中华人民共和国药典》记载的正品药材，是传统的活血化瘀类动物药。祖国医学记载和丰富的临床实践均已证明其具有破血逐瘀、续筋接骨、消炎散结和舒经活血等重要药用功效[1]。现代药理试验也充分证明地鳖虫具有溶解静脉血栓，抑制血小板聚集，抗凝血和抗癌等药效[2]。
作者前期研究证实土鳖虫蛋白粗提液及纤溶活性蛋白组分具有明显的抑瘤作用[3]。本文研究土鳖虫酶解多肽对肿瘤生长的抑制作用，及对肿瘤小鼠肝脏抗氧化作用进行研究，以期为土鳖虫在抗肿瘤作用方面的应用提供更多的理论依据。
1材料与方法
1.1试验药物
土鳖虫木瓜蛋白酶酶解液(自制)。环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司)。
1.2试剂
木瓜蛋白酶(Sigma公司)，丙二醛(MDA)检测试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
1.3动物
昆明小鼠，雄性，体重21~25 g，清洁级，由汕头大学医学院动物中心提供；H22瘤株(本实验室保存)。
1.4仪器
水浴锅(常州国华仪器有限公司)，离心机(Eppendorf公司)，酶标仪(Thermo公司)。
1.5方法
1.5.1土鳖虫多肽溶液及土鳖虫水提液的制备
取新鲜冻存的土鳖虫，自来水洗净，再用0.01mol/L的磷酸盐缓冲液(pH7.4)冲洗后，按质量体积1：2加入0.01mol/L的磷酸盐缓冲液(pH7.4)，用高速组织捣碎机匀浆，9000rpm离心15min取上清，在最佳酶解条件下用木瓜蛋白酶酶解(另文发表)土鳖虫匀浆上清液，酶解结束后9500rpm离心15min取上清，即得土鳖虫多肽溶液。上述土鳖虫匀浆上清液，即为土鳖虫水提液。
1.5.2土鳖虫多肽溶液对H22肿瘤小鼠的抑瘤作用
无菌条件下取腹腔接种H22肿瘤小鼠的腹水，用生理盐水调节肿瘤细胞浓度为1×107个/ml，按0.2ml每只老鼠的剂量接种于昆明小鼠右腋皮下，接种次日将接种肿瘤的小鼠随机分为：模型对照组、土鳖虫多肽组、土鳖虫水提液组和环磷酰胺组，每组10只，另取10只未接种肿瘤的小鼠作为空白对照组。模型对照组每日灌胃给予0.1ml/10g生理盐水，土鳖虫多肽组每日灌胃给予20g/kg(以生药量计算)的土鳖虫多肽溶液，土鳖虫水提液组每日灌胃给予20g/kg(以生药量计算)的土鳖虫水提液，环磷酰胺组每两日腹腔注射20mg/kg环磷酰胺 ......
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