榕树叶黄酮类的提取工艺研究
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【摘要】黄酮类化合物是一类活性物质，并具有特殊的保健及疗效功能。本文采用乙醇提取法提取榕树叶中总黄酮，通过正交试验设计确定最佳提取条件。结果表明，四种因素对提取率的影响分别是：乙醇浓度>料液比>提取时间>提取温度，乙醇提取法最佳工艺为：70%乙醇，料液比为l：30(g/mL)，提取温度60℃，提取1h。
【关键词】榕树叶；总黄酮 ；乙醇提取 ；正交设计
1前言
近年来,世界上掀起了植物药开发的热潮,植物药以其天然低毒的特点倍受青睐,而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。随着研究方法和技术的不断提高, 又发现了黄酮许多新的种类和生理作用，除了从药材中提取分离黄酮类化合物外,也需对其他一些未开发的药源进行研究。我国榕树分布较广，为了充分利用榕树叶资源,研究其最佳提取工艺，对我国黄酮类化合物应用于各个方面起了一定的推动作用。因此榕树黄酮是一类具有较高开发价值的物质，既可作为心血管疾病的原料药，还可广泛应用于功能食品、保健食品、饮料、食品防腐保鲜剂及化妆品中,具有广阔的开发前景。
2实验原理
我们通过时中草药成分结构分析，去估计它们的此类性质和选用的溶剂。甙类都比其甙元的亲水性强，特别是皂甙由于它们的分子中往往结合有多数糖分子，羟基数目多，能表现出较强的亲水性，而皂甙元则属于亲脂性强的化合物。[1]
总的说来，只要中草药成分的亲水性和亲脂性与溶剂的此项性质相当，就会在其中有较大的溶解度，即所谓“相似相溶”的规律。本文利用乙醇来提取榕树叶中的黄酮类物质，采用单因素和正交试验法考察乙醇浓度、料液比、温度及提取时间对榕树叶黄酮提取率的影响。
3实验部分
3.1 材料原料：新鲜榕树叶。
试剂：芦丁标准品(净重20 mg，含量99 %+)，无水乙醇(AR)，亚硝酸钠(AR)，硝酸铝(AR)，氢氧化钠(AR)。
3.2 仪器设备
DHG-90764A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)，DJ-02型中药粉碎机(上海淀久中药机械制造有限公司)，电子天平(MC京制00000249号，北京赛多利斯仪器系统有限公司)，501型超级恒温器(上海实验仪器厂有限公司)，SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)， 721E型可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)
3.3 实验方法
3.3.1原料处理新鲜榕树叶，恒温干燥箱70 ℃干燥至恒重，用粉碎机粉碎(40目筛)备用。
3.3.2黄酮的提取工艺流程榕树叶粉末→浸泡→乙醇提取→过滤→定容(10 mL) →测吸光值，计算提取率。
3.3.3工艺参数的筛选据文献资料[3]及综合因素，选用乙醇浓度、提取温度、提取时间和乙醇溶液用量作参考因素，以测定的浸取提取液中总黄酮含量作参考指标，进行正交试验，以确定最佳条件，用分光光度法测定提取液吸光度值，根据标准曲线计算粗提取液的总黄酮含量。
3.4黄酮含量的测定
3.4.1测定原理黄酮类化合物是植物的重要次生代谢产物，也是一些保健品和中药材的有效成分之一。黄酮类化合物的定量方法常用的有HPLC法和分光光度法，在实际生产和科研过程中，对于黄酮单体的定量常采用HPLC法，而对总黄酮含量的测定，考虑到方法的简便、快捷以及可行性，多采用在碱性介质中加铝盐显色的分光光度法。在碱性条件下黄酮类化合物与铝盐形成络合物、在510 nm波长处有最大吸收峰。[2]
黄酮类化合物常含有下列结构单元，故常与铝盐、锆盐、镁盐等试剂反应，生成有色配合物。
3.4.2测定方法[4]取1. 00 mL提取液于10. 0 mL 容量瓶中,分别加入5 %亚硝酸钠溶液0. 30 mL ,摇匀,静置6 min ;再加10 %硝酸铝溶液0. 30 mL , 摇匀, 静置6 min ; 再加4 %氢氧化钠溶液4. 00mL ,用60 %乙醇稀释至刻度,摇匀,静置12min ,以试剂作空白液, 用分光光度计于510nm 处测吸光度，所测样品吸光度值经标准曲线回归方程换算后，求出提取液总黄酮浓度， 然后按下式计算提取率：E%=m/M×100%
式中：E%一为提取率
m一经换算后提取液中总黄酮质量
M一样品质量
4 结果与分析
4.1 芦丁标准曲线的绘制和回归方程以芦丁为标样，准确称取芦丁10.0 mg置于烧杯中，加60%乙醇水溶液溶解并转移至100mL容量瓶，加入60%乙醇至刻度，定容摇匀即可得芦丁的标准溶(0.10mg/mL)。分别精密吸取0. 10mg/ mL芦丁溶液 0. 00 , 0. 50 , 1. 00 , 2. 00 , 3. 00 , 4. 00 ,5. 00mL于10. 0mL 容量瓶中,分别加入5 %亚硝酸钠溶液0. 30 mL ,摇匀,静置6 min ;再加10 %硝酸铝溶液0. 30 mL , 摇匀, 静置6 min ; 再加4 %氢氧化钠溶液4. 00 mL ,用60 %乙醇稀释至刻度,摇匀,静置12min ,以试剂作空白液,于510 nm 处测吸光度，结果如下。以芦丁含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，得出芦丁含量一吸光度标准曲线：Y=10.87616X-0.00313，R2=0.98628(公式中Y—溶液的吸光度；X—芦丁的含量，mg/mL)
4.2 正交实验在上述单因素试验的基础上，影响乙醇提取榕树叶黄酮物质的主要因素有：乙醇浓度、提取温度、料液比、提取时间。为优化提取条件，选用四因素三水平进行正交实验，如表4-1。按主次指标，分别将总黄酮的提取率及粗黄酮的量进行极差分析，如表4-2。
表4-1 乙醇提取工艺水平表 L9( 34 )
表4-2中可见，kA1、kA2、kA3值不相等。说明，A因素的水平变动对试验结果有影响。因此，根据kA1、kA2、kA3的大小可以判断A1、A2、A3对试验指标的影响大小。A为提取温度，而kA2>kA3>kA1，所以可断定A2为A因素的优水平，即60℃为A的优水平。
同理，通过计算可以确定B2、C1、D3分别为B、C、D因素的优水平。四个因素的优水平组合A2B2C1D3为本试验的最优水平组合，即最佳的提取工艺为：70%乙醇，料液比为l：30(g/mL)，在60 ℃提取1 h。
R表示该因素在其取值范围内试验指标变化的幅度，根据极差大小，判断因素的主次影响顺序 ......
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