利拉萘酯喷雾剂微生物限度检查方法验证
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【摘要】目的 建立利拉萘酯喷雾剂的微生物限度检查方法。方法 根据2010版《中国药典(二部)》附录XⅠJ微生物限度检查法，对利拉萘酯喷雾剂的微生物限度检查中细菌、霉菌及酵母菌计数方法进行验证和试验。结果 经方法学验证实验得出，利拉萘酯喷雾剂采用常规法进行细菌计数，采用薄膜过滤法进行霉菌及酵母菌计数。结论 经验证该微生物限度检查方法适用于利拉萘酯喷雾剂。
【关键词】利拉萘酯喷雾剂；微生物限度检查；常规法；薄膜过滤法
利拉奈酯喷雾剂[英文名称]:Liranaftate Spray 主要成份为：利拉萘酯[化学名称]：N-次(6-甲氧基-2-吡啶基)-N-甲基氨基硫代甲酸(5，6，7，8-四氢)-2-萘酯，[分子式]：C18H20N2O2S[分子量]：328.44，系角鲨烯环氧化酶抑制剂和细胞壁合成抑制剂，化学结构与托萘酯相似，适用于皮肤真菌感染的局部治疗，如体癣，股癣，足癣等。抗真菌活性为托萘酯的8倍，抗皮肤癣菌的效果较克霉唑更好。其作用原理是通过抑制真菌细胞的角鲨烯环氧化反应，阻遏细胞构成成分麦角固醇的合成，从而发挥抗真菌活性。从成份上推断，进行微生物限度检查时采用常规法不能完全消除其抑真菌性，采用薄膜过滤法可达理想效果。故对这两种方法进行验证和试验，得出合适的微生物限度检查方法。
1 仪器和材料
1.1 仪器设备架盘天平 生化培养箱 电动匀浆仪
1.2 样品利拉奈酯喷雾剂(20101201、20101202、20101203)浙江万马药业有限公司
1.3菌种大肠埃希菌[CMCC(B)44102]，枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]，金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]，白色念珠菌[CMCC(F)98001]，黑曲霉菌[CMCC(F)98003]，以上菌种来源于浙江省食品药品检验所。
1.4培养基营养琼脂培养基、玫瑰红钠培养基、营养肉汤培养基、改良马丁琼脂培养基、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液
2计数方法的验证过程
2.1 菌液制备按2010版《中国药典》(二部)附录XⅠ「1」进行。
2.2 操作方法
2.2.1供试液制备：取本品10 ml，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100 ml，混匀即为1：10的供试液。
2.2.2薄膜过滤法：取1：10供试液1ml采用薄膜过滤法，加至100 mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，全量通过薄膜后，以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜(约100 ml/次，冲洗3次)，取膜贴至玫瑰红钠琼脂平板，置规定温度培养，观察结果，计数。
2.3回收率测定
2.3.1试验组：分别取1：10供试液1ml，50-100CFU/ml试验菌株同时加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24-72小时，观察结果，计算回收率。
2.3.2菌液组：测定每一菌株的试验菌数。
2.3.3供试液对照组：测定供试品本底数。
2.3.4稀释剂组：测定稀释剂回收率。
2.4 实验结果
2.4.1 常规法测定5种阳性菌的回收率结果
表1 常规法
根据表1检验结果，细菌回收率均不低于70%，说明细菌可用常规法进行测定；霉菌、酵母菌回收率均低于70%，说明霉菌、酵母菌不宜用常规法进行测定，故采用薄膜过滤法对霉菌、酵母菌进行试验。
2.4.2 薄膜过滤法测定2种阳性菌的回收率结果
表2 薄膜过滤法 ......
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