冷沉淀制备技术在血液成分制备中的应用
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【摘要】目的 通过血液成分冷沉淀的制备研究，开发新的血液品种，确保临床用血的需要。方法 用新鲜冰冻血浆通过解冻、融化、分离、离心、冰冻等工序制备冷沉淀；随机抽取20份已制备好的冷沉淀采用血凝仪检测FⅧ和Fg的含量。结果 新鲜冰冻血浆通过解冻、融化、分离、离心、冰冻等工序制备的冷沉淀容量27±2 m1， FⅧ141.32±35 IU/袋，Fg210±20mg/袋。结论 我们制备的冷沉淀技术方法先进，产品符合国家《全血及成分血质量要求》为合格的血液品种，是临床治疗中常用血液成分，为临床治疗甲型血友病、血管性血友病，先天性或获得性纤维蛋白原缺乏症等患者的的治疗提供了保障，值得推广运用。
【关键词 】 冷沉淀；凝血因子Ⅷ ；纤维蛋白原；制备；成分血
随着输血医学的不断发展，冷沉淀制剂的临床应用倍受国内外医学界的重视[1]。冷沉淀含有丰富的凝血因子和纤维蛋白原，广泛应用于甲型血友病、血管性血友病，先天性或获得性纤维蛋白原缺乏症等患者的的治疗，也用于手术后出血，严重外伤及DIC等患者的治疗。冷沉淀是由新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)制备而成的成分血，是FFP在4℃特殊环境中通过解冻、融化、分离、离心、冰冻等工序制备而成的白色沉淀物。整个制备过程必须确保冷链，否则冷沉淀中的各项指标达不到国家成分血质量标准，将直接影响治疗效果。我们用水浴融化虹吸法(水浴融化法)制备冷沉淀，各项检测指标达到国家成分血质量要求，为临床治疗甲型血友病、血管性血友病，先天性或获得性纤维蛋白原缺乏症等患者的的治疗提供了保障，值得推广运用。
1 材料与方法
1.1 仪器 大容量离心机6000i型(美国)，低温水浴冰冻血浆解冻箱KJX-Ⅲ型(苏州)，CA-50凝血酶仪(日本)，WG-RH-I高频热合机(山东)、SW-CJ低温操作台(上海)，FJ-Ⅱ型血液分浆夹(苏州)，T-1000型电子称(上海)，MDF-U5411速冻冰箱-50℃(日本)，MDF-U460BR低温冰箱-40℃(日本)。
1.2 试剂 凝血Ⅷ因子试剂(批号536595A)，FB试剂(批号540278)，APTT试剂(批号537435)，因子Ⅷ缺乏血浆(批号5068428)均由德国Dade Behring Marburg公司提供,质控血清(批号20090106)由卫生部临检中心提供,均在有效期内使用。
1.3 血袋 四联血袋(山东威高集团医用高分子制品有限公司)。
1.4冷沉淀原料血浆的制备 用T-400四联血袋静脉抽全血400m1，6小时内分离出血浆约230 m1,立即放入-50℃以下速冻冰速冻30分钟后移至-30℃冰柜中备用。
1.5 冷沉淀的制备原理 新鲜冰冻血浆中富含凝血因子Ⅷ、凝血因子Ⅴ、纤维蛋白原(Fg)、血管性血友病因子、纤维结合蛋白，但这些成分随着保存期限的延长而逐渐失活或降低，将新鲜冰冻血浆置于4℃恒温水浴融化后分离、离心、冰冻制备的冷沉淀，可以长时间(1年)内保证凝血因子Ⅷ、凝血因子Ⅴ、纤维蛋白原、血管性血友病因子、纤维结合蛋白的活性或含量不降低。
1.6冷沉淀的制备方法 将新鲜冰冻血浆(FⅧ)置于4℃水浴冰冻血浆解冻箱中，另一空袋悬于箱外，两袋形成一定的高度落差，新鲜冰冻血浆融化时，大部分血浆即可虹吸流入空袋中，残留而未完全融化的20-30 m1的冰渣富含凝血因子Ⅷ、凝血因子Ⅴ、纤维蛋白原、血管性血友病因子、纤维结结合蛋白，将其迅速置于-40℃的低温冰箱内冻结。
1.7 FⅧ和Fg检测方法 先分别将FⅧ正常参比血清按1：5，1：10……1：160倍比稀释和将Fg定值血浆按1：2，1：4……1：16倍比稀释后，在凝血仪上分别进行检测，血凝仪根据检测数据制作标准曲线和直线回归方程式。再将冷沉淀置37℃恒温水浴中融化后取样进行检测，血凝仪自动算出FⅧ和Fg的含量。
2 结果
1.1 质量标准《全血及成分血质量要求》GB18469-2001中,冷沉淀容量25 m1-30 m1, Fg≥150mg/袋,FⅧ含量≥80IU/袋,符合质量标准者为合格。
1.2 在60份冷沉淀中随机抽检20份检测参数见表1。
1.3 临床应用情况 冷沉淀制备技术,各项检测参数达到国家《全血及成分血质量要求》GB18469-2001的质量要求, 2008年-2010年向我州临床用血机构供应冷沉淀2302.25单位,临床运用未发现输血不良反。
3 讨论
现今成分输血已广泛应用于临床，冷沉淀是临床常用的成分血，其中含有丰富的凝血因子，主要含有5种成分：丰富的凝血因子Ⅷ、凝血因子Ⅴ、纤维蛋白原(Fg)、血管性血友病因子、纤维结合蛋白。主要用于甲型血友病、血管性血友病、先天性或获得性纤维蛋白原缺乏症患者。冷沉淀也经常用于手术后出血、严重外伤及DIC等患者的治疗原因是冷沉淀中含有丰富的纤维蛋白原能促进创伤伤口愈合、防止伤口感染和阻止DIC扩散，以及用于恶性肿瘤手术和腹腔镜等手术，以减少出血，促进愈合和防止黏连[2]。凡患者的纤维蛋白原测定低于0.8g/L应输注冷沉淀作替代治疗，因此，血站应为临床提供优质高效的冷沉淀，以保证其临床疗效，充分发挥其重要功能。从表1可以看出我们制备的冷沉淀容量27±2 m1， FⅧ141.32±35 IU/袋，Fg210±20mg/袋各项检测参数符号国家《全血及成分血质量要求》。
FⅧ是一种不稳定因子，受到制备程序的影响很容易降低或失去活性[3]，为获得较高活性的FⅧ，保证临床治疗效果，在实际制备和运用过程中还应注意以下几个问题：(1)采血过程要求顺利，一针见血；(2)在采血后6小时内制备新鲜冰冻血浆，并防止血细胞的混入；(3)制备的原料浆及冷沉淀制剂要尽快冻存；(4)严格控制冷沉淀制备的环境温度和恒温水箱、离心机的温度；(5)严格控制冷沉淀的容量，防止容量过大，而含量不足。(6)冷沉淀运输过程中要在低温的容器中运输，防止融化；(7)冷沉淀融化时的温度不宜超过37℃ ......
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