不同工艺对茵栀黄注射液质量的影响
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【摘要】目的：对不同工艺茵栀黄注射液质量进行研究。方法：以黄芩苷含量、鞣质检查、澄明度为主要指标，对不同工艺的茵栀黄注射液进行质量考察。结果：工艺对质量的影响较大，其中茵陈提取总黄酮，水提醇沉制得金银花提取物，配液后进行超滤或者加壳聚糖澄清，这两种工艺较好且稳定可控。结论：两种工艺均可用于茵栀黄注射液的质量改进，是有效的方法，其中加壳聚糖澄清改进工艺的茵栀黄注射液效果同于超滤，且成本低，且工艺简单，有利于大规模生产。
【关键词】茵栀黄注射液；工艺考察；质量；药效学
茵栀黄注射液收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十四册，处方由茵陈提取物，栀子提取物，金银花提取物，黄芩苷组成。主要有效成分为：蒿属香豆素滨蒿内酯、绿原酸、对羟基苯乙酮、环烯醚萜类物质栀子苷和京尼平苷、黄芩苷、茵 陈 色酮等各种色酮。具有退黄疸、降低谷丙转氨酶、解痉利胆、抗病原微生物及利尿的作用。[1]
临床报道茵栀黄注射液有时有一定的不良反应，其原因之一是茵栀黄注射液制备工艺比较简单，没有除尽鞣质以及相关大分子。所以茵栀黄注射液工艺改进尤为必要。[4]
1实验材料
1.1药品及主要试剂
药品黄芩苷标准品(购自中国药品生物制品检定所，批号为715-8501)，供含量测定用。
试剂甲醇为色谱甲醇，水为重蒸馏水，其它均为分析纯，葡萄糖，葡甲胺。GOT、GPT试剂盒(南京建成科技有限公司), 0.1 % CCl4的大豆油溶液，0.9 %的NaCl溶液(用于稀释注射液浓度为原来的1/5)。[3]
1.2主要仪器 Waters 600E-2487型高效液相色谱仪、Millennium32色谱工作站数据处理系统，均为美国产，分析天平：十万分之一(湘仪天平仪器厂)，756型 紫外–可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)，高速冷冻离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司)，MILLIPORE 10kd超滤管，3号垂熔玻 璃器漏斗(由黑龙江中医药大学附属第一医院药物制剂科提供)。
2注射液不同制备工艺
2.1工艺一(部颁标准工艺)
2.1.1提取工艺
黄芩甙的制备：将黄芩的水提液部分浓缩，用盐酸调节pH值至1.0～2.0,80℃保温，静置，滤过，沉淀物加适量水搅匀，用40%氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，加入适量活性炭，充分搅拌，加1倍量乙醇加热搅匀，趁热滤过，滤液用盐酸调pH至2.0,60℃保温，静置，滤过，沉淀用少量乙醇洗涤后，于60℃以下真空干燥，得黄芩苷，经高效液相色谱法测定黄芩苷含量达到92.7%
(以下配液工艺均用此黄芩苷)。
茵陈提取物：由茵陈药材用90%乙醇渗漉后水沉去杂制得。栀子提取物：栀子药材用70%的乙醇回流后再用95%乙醇沉淀制得。金银花提取物：由金银花药材经水提，石硫醇法去杂制得。
2.1.2配液工艺
以上四味(茵陈提取物6g， 栀子提取物，3.2g，黄芩甙 20g，金银花提取物-以绿原酸计-4g)，取黄芩甙加水适量润湿，用氢氧化钠溶液溶解；其余茵陈提取物等三味分别加水溶解，另取葡萄糖20g，葡甲胺5g加水溶解，混匀，调节pH值,以注射用水稀释至1000ml，粗滤，过G3滤球，灌封，灭菌，即得。
2.2 工艺二
(1)茵陈提取物：以总黄酮含量为指标，经正交试验优化，确定为加10倍量70%乙醇，回流3次，每次1.5小时。合并提取液并浓缩至膏状，然后加10倍量蒸馏水沉淀，过滤后减压浓缩、干燥得茵陈提取物。(2)栀子提取物：同工艺一。(3)金银花提取物：由金银花药材经水提醇沉制得。
配液后，粗滤，过G3滤球精滤，然后用分子量为10kd的聚砜膜超滤，灌封，灭菌即得。
2.3工艺三
提取同工艺二；配液后，粗滤，然后过G3滤球精滤，滤液加适量0.5%的壳聚糖水溶液(经反复试验后，确定加入量为5%)澄清，离心后，取上清液，减压浓缩到原来体积，灌封，灭菌即得。
2.4工艺四
茵陈和栀子用量按部颁标准的出膏率折算成药材，金银花和黄芩按药材中绿原酸和黄芩苷含量折算，四味药材混合后，水提醇(75%)沉，过滤，减压浓缩至无醇味，按部颁标准配液工艺配液后，粗滤，过G3滤球精滤，然后用分子量为10kd的聚砜膜超滤，灌封，灭菌即得。
2.5工艺五
混合提取同工艺四。按部颁标准工艺配液后，粗滤，过G3精滤，然后加0.5%的壳聚糖水溶液适量(经反复试验后，确定加入量为5%)澄清，离心后，取上清液，减压浓缩到原来体积，灌封，灭菌即得。
3不同工艺对质量的影响
3.1黄芩苷含量的测定
3.1.1色谱条件：色谱柱：Diamonsil C18柱(4.6×250mm，5µm)；流动相：甲醇— 0.2%磷酸(47：53)；流速：1.0 mL/min；检测波长：280nm，进样量：10μL，柱温30℃，理论塔板数按黄芩苷峰不低于2500
3.1.2溶液制备：
对照品溶液的制备：精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.34mg的对照品溶液。
供试品溶液的制备：精密吸取注射液1ml加入到25ml容量瓶中，然后加注射用水稀释至刻度，再从25ml容量瓶中吸取1ml加入到10ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，过0.45um微孔滤膜，即得。
3.1.3标准曲线的制备：
精密吸取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml分别加入到1ml容量瓶中，加甲醇定容，配成不同浓度的对照品溶液，过0.45um微孔滤膜后进样10ul，按上述色谱条件测定峰面积，以浓度(mg/ml)为横坐标，峰面积为纵坐标,计算回归方程为：Y=20667446.75X﹣133285.7793，相关系数r=0.9992.表明黄芩苷在34～170ug/ml范围内线性关系良好。
3.1.4方法学考察：
精密度试验：精密吸取同一对照品溶液，进样量10ul，连续进样6次，测定黄芩苷的峰面积，结果RSD=0.38%.表明仪器精密度良好。
重复性试验：取同一份茵栀黄注射液，按供试品溶液的制备方法制备6份样品液，分别测定黄芩苷含量，结果RSD=1.21%，表明此方法的重复性良好。
稳定性试验：取供试品溶液一份，分别在0、2、4、8、16、24h进样测定黄芩苷峰面积，RSD=1.63%
加样回收率试验:精密吸取已知含量的注射液0.15、0.3、0.45ml于不同的10ml容量瓶中，分别加入黄芩苷对照品贮备液1ml、2ml、3ml，配成低、中、高浓度各三份，按标准曲线的制备下的方法进行含量测定，计算加样回收率，结果见表1：
3.2鞣质及澄明度的检查
3.2.1鞣质的检查取注射液1 ml，加稀盐酸1滴，再加氯化钠明胶试剂4～5滴，不得出现浑浊和沉淀。
3.2.2 澄明度的检查 采用肉眼观察法。于灯检架下按常规进行检查。
3.3结果
以上个结果均见表2。
5讨论 ......
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