HPLC法测定清热解毒片中绿原酸的含量
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【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定清热解毒片中绿原酸的含量方法。方法 实验条件为色谱柱：KromasilC18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：乙腈-0.4%的磷酸(20：80)检测波长：324nm，流速为1.0ml﹒min-1。结果：绿原酸平均回收率为 98.89%，RSD为0.68%(n=6)。结论：该法简便，结果准确，专属性强，重现性好,可将其作为清热解毒片的质控指标之一。
【关键词】HPLC法；清热解毒片 ；绿原酸
Content Determination of Chlorogenic acid in Qingrejiedu Films by HPLC
Wangchunli
(Zhoukou Municipal Institute For Food and Drug Control,Zhoukou 4660000)
【Abstract】ObjectiveTo establish high performance liquid chromatography to detect the contents of qingrejiedu films chlorogenic acid .Methods:the experimental conditions for chromatographic column KromasilC18(250mm×4.6mm，5μm),mobile phase: acetonitrile-0.4%phosphate(20:80),Detected wavelength: 324nm,tending now velocity of 1.0ml﹒min-1. Results: the average recovery for pingyi 98.89% ,RSD 0.68% (n=6)。ConclusionThe method is simple,accurate and strong specificity,reproducible and can be as qingrejiedu films slice quality indexes.
【Key words】HPLC； qingrejiedu films； chlorogenic acid
清热解毒片是由生石膏、金银花、栀子、连翘、黄芩等十二味中药组成，具有清热解毒的功效，临床主要用于热毒壅盛所致发热面赤、烦燥口渴、咽喉肿痛；流感、上呼吸道感染见上述症候者。为临床常用药。其质量标准収载于《卫生部药品标准》[1]，现行质量标准只对绿原酸和栀子苷进行了薄层鉴别，无含量测定的方法。而方中金银花的用量和功用占主导地位。本文参照《中国药典》双黄连口服液[2]和药材金银花[3]的含量测定方法，采用HPLC法以绿原酸为质控指标对清热解毒片中的金银花进行含量测定。实验结果表明，本文所建立的方法，具有良好的专属性、准确度和重现性，并且操作方法简单，所用的色谱系统也很普遍。故将其作为含量测定质控指标之一。
1仪器与试药
LC-10ATvp型高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD-10Avp型紫外检测器，N2000型色谱数据工作站，92SM-202A型普利赛斯电子分析天平。绿原酸对照品(批号：110753-200413，中国药品生物制品检定所)，清热解毒片(河南百年康鑫药业有限公司 20091002,20100201,20101213)，乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为重蒸馏水。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：KromasilC18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.4%的磷酸(20:80)；检测波长：324nm；流速：1.0ml﹒min-1；进样量：20μl；柱温：室温。理论塔板数按绿原酸峰计算不低于6000；分离度大于1.5。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品50.23mg，置于100ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取2ml置于25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀；即得对照品溶液。
2.2.2供试品溶液的制备
取本品20片，除去糖衣，精密称定，精密称取相当于一片的量，置于50ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇溶解，再加50%甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
2.2.3阴性对照溶液的制备
取处方中不含金银花的药材，按工艺制成却金银花的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液.
2.3线性关系考察
精密量取上述储备液1，2，3，4，5，6ml分别置于50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件，分别取20μl进样，记录色谱图。以峰面积Y对对照品进样量(μg﹒ml-1)作线性回归。结果回归方程(n=6)为：Y=3867738х-7056181 г=0.9996
线性范围为：10.046μg﹒ml-1-60.276μg﹒ml-1
2.4精密度试验
取线性关系考察中绿原酸浓度为40.184μg﹒ml-1的对照品溶液，重复进样5次，结果RSD为1.56%。
2.5阴性干扰试验
取阴性对照溶液，依上述色谱条件测定。结果表明，阴性对照溶液对含量测定无干扰.
2.6稳定性实验
取重复性实验中的第一份溶液，室温下在0、1、2、4、6小时测定，结果表明，本品的供试品溶液在室温6小时内基本稳定，RSD=1.63%，n=5。
2.7重复性实验
精密称取同一批号样品(批号：20100201)6份，按样品测定项下的方法 ......
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