富硒黑木耳中硒多糖的提取工艺及营养成分测定分析报告
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【关键词】富硒黑木耳；硒多糖
黑木耳是我国珍贵的药用和食用真菌，味道鲜美，营养丰富，近年来，有关黑木耳的较强的富硒能力，可通过菌丝体使无机硒吸收转化富集于子实体中，黑木耳硒多糖是一种免疫激活剂，能通过活化WK细胞阻止癌细胞增生，该产品具有具有增强免疫功能，抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗辐射，降血脂等多种活性，因此，进行黑木耳多糖的研制，对于开发高附加值食用菌系列产品，开拓国内外市场，振兴经济，具有重要经济效益，对防病治病，抗肿瘤研究，提高人们免疫功能，具有重大的社会效益。本项研究是应用生物工程方法，以富硒黑木耳为原料，提取黑木耳硒多糖并确定最佳提取工艺的条件，并对其进行营养成分测定及生物学特性、毒理学、药理学等进行研究。
1富硒黑木耳中硒多糖的提取工艺
1.1试验材料：原料：富硒黑木耳。试剂：95%乙醇、氯仿、戊醇、正丁醇a--苯酚试剂。仪器：冷冻干燥机、离心机。
1.2试验方法及设计：工艺流程：富硒黑木耳干燥品一粉碎(12目筛)一加水浸泡一加热一煎煮(三次)一过滤一浓缩一过滤一醇析一离心得沉淀物一加蒸馏水溶解一醇析一离心得沉淀物一除蛋白(seavg法)一醇析一减压干燥一硒多糖成品
操作方法：将富硒黑木耳干燥品粉碎成粗粉，(过1 2目筛)加20倍量水，浸泡过夜，加热煎煮三次，每次2小时，过滤，滤液合并，浓缩至含黑木耳lg/ml比例，静置过夜，过滤，加90%乙醇，使含醇量达60%，静置24小时以上，离心分离出沉淀物。沉淀物加蒸馏水溶解(稍加热)，浓度达lg/ml黑木耳，加90%乙醇使醇浓度达55%，同上离心处理，然后用sevag法除蛋白5--6次，(用氯仿、戊醇按4:1比例混合后，加至样品中振摇，样品中的蛋白质与混合液形成凝胶，可用离心法除去)。沉淀物用乙醇反复洗涤，最后一次溶解后，加醇沉淀浓度达50%，分离沉淀物后，减压干燥，得硒多糖成品。提取率22. 5%，用苯酚一硫酸法测定硒多糖中多糖含量为71. 86g%，用2、3——二氨基萘荧光分光比色法，测硒含量为18. 67ug/g。
2富硒黑木耳中成分的测定
2.1粗蛋白的测定：采用凯氏氮法：样品经硫酸消化使蛋白质分解，其中氮元素与硫酸化合成硫酸铵，然后加碱蒸馏使氮游离、硼酸吸收，用盐酸滴定，根据盐酸消耗量，计算出蛋白质含量。
2.2粗多糖的测定：采用苯酚—硫酸法：原理：苯酚—硫酸试剂可与多糖中的已糖，糖醛酸起显色反应，已糖在490nm处有最大吸收，吸收值与糖含量呈现性关系。
操作：(1)制作标准曲线，准确称取标准葡聚糖20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml，各以水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml，静止10分钟，摇匀，室温放置20分钟，于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。(2) 样品含量测定：吸取样品液1.0ml(相当于40mg左右的多糖)按上述步骤操作，测光密度，以标准曲线计算多糖含量。
3粗纤维的测定
采用容量法测定：试样用2%盐酸溶解除去杂质，(可溶性糖、淀粉等)，用80%硫酸使粗纤维溶解并加热水解为葡萄糖，进行测定，再换算为纤维素定量。
4氨基酸的测定
方法：准确称取试样0.1000g，用6mol/l盐酸封管 ......
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