正交试验优选延胡索提取工艺
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【摘要】 目的：优选延胡索最佳提取工艺。方法：采用正交试验法，以延胡索提取的浸膏得率和延胡索乙素提取率为考察指标，利用HPLC法测定延胡索乙素的含量。结果：最佳提取工艺为延胡索粉加6倍量80%的乙醉回流提取3次，每次2h。结论：优选得到的工艺简便易行，稳定性好。
【关键词】 延胡索；延胡索乙素；提取工艺；正交试验
Optimization of Extraction Process of Rhizoma Corydalis with Orthogonal Design Method
【Abstract】 Obijective:To optimize the best extraction process of Rhizoma Corydalis.
Method:Using orthogonal design method, to apply extract yield of Rhizoma Corydalis and the extract amount of Trahydropalmetine as observing indexes, to measure the content of Trahydropalmetine with HPLC.Result:The optimum extraction process was as follows, adding 6 times of 80% alcohol into Corydalis meal, refluxing and extraction for 3 times, two hours every time. Conclusion: This optimized process is simple, stable and efficient.
【Key words】 Rhizoma Corydalis; Trahydropalmetina; Extraction process; Orthogonal design
延胡索为常用中药，其主要有效成分是以延胡素索乙素为代表的生物碱，其中药制剂一般使用酸水提取或一定浓度的乙醇提取[1-2]。但据有关报道[3]，延胡索中的生物碱在水提过程中因长时间受热会部分分解，为尽量减少延胡索有效成分的损失，采用正交设计方法，以不同浓度的乙醇为溶剂采取回流提取，以延胡索提取的收膏率和延胡素乙素提取量[4]为考察指标，优选延胡素的最佳提取工艺，为实际生产提供参考。
1 仪器及试药
1.1 仪器 美国Waters600-2996高效液相色谱仪(PDA紫外检测器，EMPOWER化学工作站)；KQ-100A型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；E12140 万分之一电子天平(OHAC)；320-SdeltaPH计(梅特勒一托利多)。
1.2 药品与试剂 延胡素乙素对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用)：实验药材来自钟祥市人民医院药房，经鉴定符合2005年版药典。甲醇、乙腈，色谱纯。乙醇、乙醚，分析纯，双蒸水为自制，其他试剂为分析纯。
2 测定条件及方法
2.1 色谱条件 参照中国药曲2005版一部[5]选用色谱柱：Agilent HC—C18(250mm X 4.6mm，5um):流动相：甲醇—0.1%磷酸(用三乙胺调pH至6.0)(38:62)：检测波长：280mm: 柱温:30℃流速：1ml/min: 进样量:10ul,延胡索乙素与其它组分达到基线分离.分离度不低于2.0.理论塔板数以延胡索乙素峰面积计算不低于3000。
2.2 对照品溶液及阴性对照品溶液的制备 精密称取延胡索乙素对照品0.0006g，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
2.3 供试品溶液的制备 取延胡索提取所得干浸膏0.2g，精密称定，加甲醇30ml溶解，超声处理30min，用甲醇定容至50ml，滤过，弃去初滤液，精密吸取续滤液0.5ml，再用甲醇定容10ml，混匀，取得。
2.4 线性关系的考察 取标准品溶液适量分别配制成12.24.36.48.60ug/ml浓度的溶液，各吸取10ul入色谱仪，按上述色谱条件进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线得回归方程为Y=7.93 x 105X—1.00x103(r=0.9997)结果表明：延胡索乙素在0.12—0.60ug范围内具有良好的线性关系。
3 正交试验设计及结果
3.1 正交试验设计方案 根据所查资料，延胡素中主要有效成分为延胡索乙素，它易溶于氯仿、乙醚，难溶于石油醚，在冷水中也不易溶解，但易溶于热乙醇，几不溶于水或碱性水溶液，我们采用乙醇回流提取的方法，以延胡索乙素含量为评价指标，综合考虑了影响回流提取的几个因素，即乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数，对各个因素设置了三个水平，进行L9(34)正交试验，以确定最佳提取工艺条件。见表1
表1 因素水平表
3.2 试验结果 取延胡索粗粉适量，按表1安排试验，提取液减压回收乙醇，真空干燥至恒重，得干浸膏，称重。按供试品溶液制备方法制备，精密吸取供试品溶液10ul，进样，测定，并计算样品中延胡索的含量。试验结果见表2
表3 醇提部分方差分析表
由表2可知，在本实验考察范围内，有两因素均对实验结果有显著影响，其中B为极显著影响的因素，A为显著影响因素，C、D的影响效果不明显。
根据表3直观分析中极差R的大小，四因素对实验结果影响程度为B>A>D>C。即乙醇浓度影响最大 ......
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