不同方法炮制蒲黄之总黄酮变化研究
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【摘要】 目的：验证蒲黄用不同方法炮制前后总黄酮含量是否发生变化。方法：采用紫外-可见分光光度法，测定蒲黄中总黄酮含量。结果与结论： 生蒲黄总黄酮的含量为2.459%，炭蒲黄总黄酮的含量为1.156%，醋制蒲黄总黄酮的含量为2.318%。
【关键词】 蒲黄；总黄酮；紫外可见分光光度法
蒲黄系香蒲科植物水烛香蒲Typha angustifolia L.、东方香蒲Typha orientalis Presl或同属植物的干燥花粉。蒲黄味甘，性平。归肝、心包经。具有止血化瘀、利尿通淋等功效。用于血瘀所致经闭，痛经，产后瘀滞腹痛，跌打损伤等。生品性滑，偏于活血化瘀、利尿通淋。炒炭后性涩，止血作用增强。常用于咯血、吐血、尿血、便血、崩漏及外伤出血。醋炙蒲黄入肝经，有解毒消肿，活血散结止痛之功。有文献[2]报道，生蒲黄具有延长小鼠凝血时间和较大剂量下的促纤溶性，而炭蒲黄则能明显缩短小鼠凝血时间，无促纤溶活性。可见炮制前后蒲黄的药理作用的改变，主要体现在总黄酮的含量变化。本研究采用紫外-分光光度法测定蒲黄炮制前后总黄酮的含量，以探讨蒲黄炮制的意义。
1 仪器与试药
Sartorius 10-4电子天平(BS124S)，紫外分光光度计(UV-1800PC)。芦丁对照品(购自中检所，批号：100080-200306，供含量测定用)，无水乙酸钠(分子量：82.03), 三氯化铝(分子量：241.43)，水为蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
2 试验方法与结果
2.1 蒲黄的炮制[3] 生蒲黄：取原药材，过细筛除去残存花丝及杂质。
炭蒲黄：取净蒲黄置锅内，用中火加热炒至棕褐色，喷淋水少许，灭尽火星，出锅，晾凉。
醋蒲黄：取净蒲黄，喷使用醋适量，拌匀，微火炒干，出锅晾凉。每净蒲黄100kg ,用醋20kg。
2.2 对照品溶液的制备 取芦丁对照品219.6mg，精密称定，置100mL容量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取溶液10mL，置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。(每1mL中含芦丁0.2196mg)。
2.3 供试品溶液的制备 取生品蒲黄、炭蒲黄、醋蒲黄各1g，精密称定，置索氏提取器中，分别加乙醚120mL加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液，再加甲醇95mL，加热回流至提取液无色，转移至100mL容量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.4 测定方法及检测波长的选择 三氯化铝显色法 精密量取各供试品溶液2mL置25mL量瓶中，加0.1M三氯化铝溶液3mL及1M乙酸钠溶液5mL，加甲醇至刻度，摇匀，放置5min，以相应试剂为空白，在190-800nm范围内扫描光谱，同时依法操作得同条件下芦丁对照品光谱图。该法显示供试品与对照品在273nm处有相同的最大吸收，故选择三氯化铝相显色法。
2.5 精密度试验 精密称定蒲黄生品Ⅲ供试品溶液2mL，按照前述方法进行测定，连续测定6次,结果表明，蒲黄生品Ⅲ供试品溶液吸收度的 RSD为4.06%，说明精密度良好。
2.6 稳定性试验 精密量取蒲黄生品II供试品溶液2mL，按照前述方法进行测定，然后每隔10min测定一次吸光度。结果表明，供试品溶液在2小时内稳定性良好，在显色30min-60min之内测定，结果更为准确。
2.7 加样回收率试验 取已知总黄酮含量的蒲黄生品(总黄酮含量2.459%)约1g，精密称定，共取6份，分别准确加入芦丁对照品溶液约10mL，按前述方法制备成供试品溶液，并按含量测定方法进行测定，计算回收率。回收率为97.52%(n=6)，RSD=1.44%。说明该测定方法测定结果准确。3 样品含量测定
按前述方法对生蒲黄、炭蒲黄、醋炒蒲黄进行含量测定，在上述分光光度法测定条件下进行测定，测定结果见表2。
表2 蒲黄总黄酮含量测定(mg/g)
4 小结与讨论
4.1 试验结果表明生蒲黄总黄酮含量>醋炒蒲黄>炭蒲黄总黄酮含量。醋炒蒲黄与生蒲黄相比,总黄酮含量减少, 此外,醋炒蒲黄经过一定时间的加热,这一实验结果证明炮制时加醋对蒲黄化学成分含量产生影响。炭蒲黄总黄酮含量明显少于生蒲黄总黄酮含量，这应当与黄酮类化合物在高温下结构易发生变化或遭到破坏有关,而且温度越高,破坏性越大,含量减少越多。正常人体内血液凝固和纤维蛋白溶解这两个过程处于动态平衡,即血液在生理功能上存在凝血抗凝血两个对立而统一的矛盾过程,二者相辅相成。血小板聚集性与血液凝固性紧密相关。活血化瘀药药理作用之一是明显抗血小板聚集,其终极结果是改善器官的血液循环,使血流通达。蒲黄中总黄酮具明显抗血小板聚集作用,是蒲黄活血化瘀主要有效成分之一。蒲黄经过炮制后,活血化瘀有效成分总黄酮含量减少,则止血作用相对增强 ......
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