高效液相色谱法测定两种中药颗粒中甘草酸含量
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【摘要】 目的：探讨高效液相色谱法测定两种中药颗粒中甘草酸含量，并且论述了其提取工艺。方法：应用高效液相色谱法同时测定复方甘草酸苷颗粒和甘草酸二铵颗粒的2份样品中甘草酸的含量，并分析比较了提取方法和测定条件。结果：甘草酸在276nm处有最大吸收，最佳提取条件为：乙醇用量6倍于样品质量，提取温度为60℃，pH值为12。同时在测定中，操作简便迅速，准确度和精密度均较理想，重现性好。结论：高效液相色谱法测定复方甘草酸苷颗粒和甘草酸二铵颗粒中的甘草酸，操作简便迅速，精密度和准确度均较理想，稳定性强，回收含量高，值得推广应用。
【关键词】 高效液相色谱法；复方甘草酸苷颗粒；甘草酸二铵颗粒；甘草酸
本文建立了一种高效液相色谱分析方法来测定两种中药的甘草酸含量。结果表明该方法操作简便迅速，精密度和准确度均较理想，稳定性强，回收含量高，可为测定中中药颗粒中甘草酸物质提供方法依据。现报告如下。
1 材料与仪器
试剂：95% 乙醇；无水乙醇；氯仿；正丁醇；丙酮；无水乙醚；盐酸；碳酸钡；；乙酸酐，以上试剂均为分析纯。仪器：UV-2401P紫外分光光度仪(岛津公司)，TG328B光电分析天平(岛津公司)；CKQ-250DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。gilentlloo高效液相色谱仪(岛津公司)；HH-s2系列恒温水浴锅(岛津公司)；FTIR-8400S型红外光谱仪(岛津公司)； GSP-84-02型磁力恒温搅拌器(岛津公司)。复方甘草酸苷颗粒(万通药业公司，批准文号：国药准字Z23020820/Z23020822)。甘草酸二铵(北京制药厂，国药准字H20056547)。
2 方法与结果
2.1 甘草酸的提取 复方甘草酸苷颗粒和甘草酸二铵颗粒各100mg加入6倍体积量(V/V)的60%乙醇，NaOH饱和溶液调节pH至12，温度：60℃，加热回流提取2次，得到提取液200ml，然后进行减压浓缩得到浓缩液约100ml。然后重复浓缩液萃取得到甘草酸粗品约25.0mg，经HPLC检测纯度超过80%。然后再进行色谱柱分离，60%甲醇洗脱，得到甘草酸纯品约13.5mg，HPLC检测纯度符合药典标准。同时扫描结果显示，两种中药的甘草酸在276 m波长处吸收最强，灵敏度较高。以峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程：甘草酸Y=13.614X-1.4897，r=0.9999。线性范围为10.2-102μg/mL-1。
2.2 样品的准备 将每种颗粒2份不同生产日期生产的复方甘草酸苷颗粒抽提后放置20mL容量瓶中，用提取液约15mL浸泡，室温下放置4小时，然后超声提取30分钟，过滤后滤液于物理蒸干溶剂，残渣用6mL甲醇-甲酸溶解，然后定容于5mL容量瓶中，4℃下保存待测。
2.3 精密度和准确度 取混合对照品溶液20 mL，进行HPLC检测，测得甘草酸面积的相对标准偏差分别为0.59%，显示其精密度良好。然后精密称取已知含量的每种颗粒2份药物样品，按样品准备与处理方法制备计算回收率，结果分别为94.2%、94.0%、95.2%和95.8%，显示其回收率高。具体情况见表1。
2.4 稳定性试验 每种颗粒2份样品按照制备方法制备溶液后，分别于0小时，1d，2d，3d时进样测定，测定结果的峰面积的相对标准稳定性偏差见表2，结果表明2份样品溶液在3 d内基本都能保持稳定。
表2：药物样品甘草酸的稳定性
3 讨论
我国传统的中医理论认为，甘草能和中益气、润肺去痰、清热解毒、补脾和胃及调和诸药，对内分泌系统、消化系统、免疫系统、呼吸系统等都有不同程度的药理作用，应用十分广泛。现代药理学认为甘草酸具有肾上腺皮脂激素样作用，可增强内耳听觉、并且能够抗炎、抗变态反应、解毒止咳、抗肿瘤、影响脂质代谢等作用。另外甘草酸具有广泛的免疫调节作用，对巨噬细胞活性及产生免疫调节介质、对淋巴因子产生调节、NK细胞活性调节、对抗体产生调节、对肥大细胞产生调节、对补体产生调节等。
本试验建立了测定复方甘草酸苷颗粒和甘草酸二铵颗粒中甘草酸的HPLC法， 在选择检测波长时，以流动相为溶剂稀释对照品，采用紫外分光光度法在200-400扫描吸收光谱，结果表明甘草酸在276nm处有最大吸收，最佳提取条件为：乙醇用量6倍于样品质量，提取温度为60℃，pH值为12。还有在测定中，操作简便迅速，精密度和准确度均较理想，稳定性强，回收含量高，可为测定中复方甘草酸苷颗粒和甘草酸二铵颗粒中甘草酸物质提供方法依据 ......
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