慢性HBV感染者外周血淋巴细胞亚群及自然杀伤细胞检测的临床意义(1)
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【摘要】 目的：研究慢性乙型肝炎及慢性乙型肝炎肝硬化等慢性HBV 感染者患者外周血淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞的变化特点。方法：采用流式细胞术检测71例慢性HBV感染者外周血T淋巴细胞亚群、CD3- / CD16+ CD56+ 细胞(NK细胞)以及CD3- CD19+ 细胞(B细胞)进行检测，并与26例健康体检者(对照组)进行比较分析。结果 慢性乙型肝炎(慢乙肝组)患者CD3+ CD4+细胞(CD4+T细胞)及NK细胞百分比降低,B细胞百分比增加,与对照组比较差异有统计学意义。慢性乙型肝炎肝硬化(肝硬化组)患者CD3+T细胞、CD3+ CD4+细胞(CD4+ T细胞) 、CD3+ CD8+细胞(CD8+ T细胞)及NK细胞百分比均明显下降(P<0.05),B细胞百分比及CD4+/CD8+增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论：慢性HBV感染者体内存在淋巴细胞亚群失衡和细胞免疫功能紊乱。外周血淋巴细胞亚群及NK细胞检测对于了解患者免疫状态,判定病情发展阶段以及估计预后有一定临床应用价值。
【关键词】 淋巴细胞亚群；慢性乙型病毒性肝炎; 肝硬化；自然杀伤；细胞(NK细胞)
本文比较分析慢性HBV感染者(包括慢性乙肝患者、乙型肝炎肝硬化患者)、正常健康体检者的外周血淋巴细胞亚群及NK细胞的变化特点, 旨在了解慢性HBV 感染的不同疾病阶段，T细胞亚群、B淋巴细胞以及NK细胞的变化规律及其临床意义。
1 材料与方法
1.1 研究对象 选取2010年10月~2011年5月在我院住院诊治及门诊患者71例,男40例,女31例，年龄23~70(36±22)岁。其中慢性乙型肝炎(慢乙肝组)34例、肝炎肝硬化(肝硬化组)37例,所有病例均符合2000年西安第十次全国病毒性肝炎及肝病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案诊断分型标准[1]。选择26例健康体检者为对照组。所有病例均未给予干预免疫及抗病毒药物治疗。排除酒精性肝炎、脂肪肝、自身免疫性肝炎等其他肝炎; 排除肿瘤、自身免疫性疾病、其他感染性疾病及心血管疾病。
1.2 仪器和试剂 采用美国Beckman Coulter公司EPICS-XL流式细胞仪; EDTA-K2抗凝管；CD3、CD4、CD8、CD19及CD16、CD56各种荧光标记单克隆抗体为美国BD公司产品。
1.3 实验方法 采用流式细胞术检测淋巴细胞亚群及NK细胞，所有病例晨间空腹抽取外周静脉血2ml，于EDTA-K2抗凝管,6小时内分析。外周血淋巴细胞亚群及NK细胞检测均采用流式细胞检测技术,由我院检验中心专人操作检测。
1.4 统计学处理 采用SPSS 11.0统计软件,计量数据以均数±标准差(±s)表示,方差齐性检验后,组间比较采用t检验。(P<0.05)为差异有统计学意义。
2 结果
外周血淋巴细胞亚群及NK细胞检测结果见表1。按对照组、慢乙肝组及肝硬化组,CD3+T细胞、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞及NK细胞百分比呈逐步递减，以肝硬化组患者下降最为明显,与对照组相比有统计学义(P<0.05);慢乙肝组患者CD4+ T细胞、NK细胞百分比降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。慢乙肝组、肝硬化组患者，B细胞百分比值均增高, 但慢乙肝组CD3+T细胞、CD8+ T细胞、CD4+/CD8+与对照组相比,差异无统计学义(P>0.05)。
表1 慢性乙型肝炎患者及对照组淋巴细胞亚群和NK细胞数量的变化 (%,x±s)
与对照组比较，* P<0.05；与对照组比较，﹟P>0.05；与肝硬化组比较，△P<0.05；
3 讨论
近年来，研究免疫细胞参与免疫反应和炎症反应的过程已成为目前乙肝肝硬化发病机制的研究热点之一[2]。HBV感染机体后, 并不直接损伤肝细胞, 而是通过诱导机体免疫间接损伤肝细胞。细胞免疫反应是HBV感染后引起肝细胞损害的主要机制[3]。淋巴细胞是人体主要的免疫细胞, 其数量的变化在一定程度上反映了机体的免疫水平。T 淋巴细胞是宿主抗病毒、抗肿瘤免疫反应中起主导作用的免疫活性细胞, 构成了免疫系统的主要部分。Delhem 等[4] 通过实验证明T淋巴细胞在HBV慢性感染者和乙肝肝硬化患者中起主要作用, T 淋巴细胞亚群的变化程度与病情进展有相关性, T 淋巴细胞亚群变化、机体免疫功能紊乱是乙肝肝硬化及肝细胞受损的重要机制, T淋巴细胞在免疫应答中起关键性作用,人成熟T 细胞按表型不同可将其分为CD4+ T细胞和CD8+ T 细胞。CD3+ 代表总T 淋巴细胞,CD4+ T 细胞为辅助性T 细胞, 能促进B 细胞、细胞毒性T 淋巴细胞和其他免疫细胞的增殖及分化, 调节体液免疫和细胞免疫。在免疫应答中起辅助诱导作用, 还分泌淋巴因子, 诱导巨噬细胞活化, 并引起肝细胞损伤CD8+细胞主要为细胞毒性T细胞,是机体清除病毒感染细胞的主要效应细胞。我们的研究表明,肝炎、肝硬化患者CD3+ T细胞、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞百分比均明显降低,与对照组相比有显著性差异,与文献报道一致[5,6]。慢性乙型肝炎患者CD4+ T细胞、CD8+ T细胞减少导致细胞免疫功能低下,使机体无法有效清除病毒,使病情迁延进展,故CD4+ T细胞、CD8+ T细胞减少可能在HBV感染慢性化过程中起重要作用。本研究中肝硬化组患者CD4+/CD8+比值明显增高,考虑可能与乙型肝炎病情进展致CD8+细胞耗竭,CD8+数量减少较明显有关。Lombardo等[7]观察到乙肝肝硬化患者外周血中CD3、CD4、CD8、CD16、CD19、CD20及CD56 T 淋巴细胞亚群均减少, 乙肝肝硬化程度越重淋巴细胞数目越少, 尤以CD3+、CD4+ T 淋巴细胞数量下降最明显(P<0.05)，本研究也支持上述结论。本研究中通过同时观察7例慢性重型乙型肝炎患者发现CD3+ T细胞、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞比例较上述各组进一步降低(而NK细胞比例同样较上述各组进一步降低,而B淋巴细胞比例呈进一步增多趋势)，其变化与病情严重程度一致, 进一步提示外周血T淋巴细胞的变化可作为判断慢性肝炎病情发展、评估疗效和预后的观察指标。
有研究认为HBV感染人后,激发机体免疫系统使致敏B细胞转化为浆细胞,产生能与相应抗原结合的抗体,特异性体液免疫在HBV病程中起一定作用 ......
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