HPLC法测定双黄连注射液中黄芩苷和连翘苷的含量
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【摘要】 目的：建立测定双黄连注射液中黄芩苷和连翘苷含量的高效液相色谱法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Waters Symmery C18 ( 250mm×4.6mm,5μm ),流动相为乙腈—水(25﹕75)，流速为1.0ml/min，检测波长为227nm，柱温为30℃。结果：黄芩苷、连翘苷的线性范围分别为1.63～8.51；0.43～2.14，重复性试验的RSD为 0.91 %、1.59% (n=6) ，平均回收率为 92.56%、95.75%，RSD分别为0.82%、2.39%(n=6)。结论：本方法简便易行，结果准确，可用于双黄连注射液的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱法；双黄连注射液；黄芩苷；连翘苷；含量测定
determination of baicalin and forsythin content in Shuanghuanglian injection by HPLC
Li Xiaoyun，Li Xiaoliang (Hezhou People's Hospital, Guangxi Hezhou, 542800)
【Abstract】 Objective To set up a HPLC method for the determination of baicalin and forsythin content in Shuanghuanglian injection. Methods HPLC column was Waters Symmery C18(250mm×4.6mm, 5μm), the mobile phase was acetonitrile - water(25∶75)，the detection wavelength was 280 nm and the flow rate was 1.0 ml *min-1, the column temperature was 30℃.Results The linear range of Baicalin and Forsythin were 1.63～8.51； 0.43～2.14，the RSD of the repeatability test were 0.91%,1.59% (n = 6)，The average recovery rate of forsythin were 92.56%、95.75%，the RSD were 0.82%、2.39%(n= 6).Conclusion The method is simple，convenient，accurate and reliable，which can be used for quality control of Shuanghuanglian injection.
【Key words】 HPLC; Shuanghuanglian injection; baicalin; forsythin; determination
双黄连注射液是由金银花、黄芩、连翘三味药材经科学方法提取的无菌注射液，是临床常用的中药注射剂，主要功效为清热解毒，具有抗菌抗病毒作用。目前，双黄连注射液收载于《卫生部中药成方制剂》第七册，原标准中只收载了黄芩苷的含量测定方法，没有金银花和连翘的含量测定方法，因此本文通过系统摸索，获得了HPLC同时测定双黄连注射液中黄芩苷、连翘苷两个指标性成分的色谱条件，相应的方法学考察结果表明，本研究所建方法简单，结果准确，可用于双黄连注射液的质量控制，现报道如下。
1 仪器与试药
1200型高效液相色谱仪(美国 Agilent 公司)；CP225D型电子天平(德国赛多利斯公司)；AW-120型电子天平(西班牙 COBOS 公司)。
黄芩苷、连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所；批号分别为110715-200514、110821-200711)；双黄连注射液(黑龙江多多药业有限责任公司，批号：08050731、080310212 、070920312 )乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯，水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Waters Symmery C18 ( 250mm×4.6mm,5μm )；流动相：乙腈—水(25﹕75)；检测波长：227nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量：供试品30?l、连翘苷5μl、黄芩苷10μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取经五氧化二磷减压干燥12h以上的黄芩苷、连翘苷对照品适量，分别加入50%甲醇制成每1ml含连翘苷42.82?g、黄芩苷 16.30 ?g的对照溶液。
2.2.2 供试品溶液 精密量取本品20ml，置水浴上蒸至约5ml，加中性氧化铝5g,搅拌混匀后，加至中性氧化铝柱(粒度量100～200目)，2g，内径1cm)上，用70%乙醇适量洗涤容器，洗液加于柱上，继续用70%乙醇洗脱，收集洗脱液160ml，蒸干，残渣加50%甲醇适量温热使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
2.2.3 阴性样品溶液 取不含黄芩和连翘的阴性样品，同法(2.2.2)制备阴性样品溶液。
2.3 专属性试验 分别吸取对照品溶液连翘苷5μl、黄芩苷10μl，供试品溶液、阴性样品溶液各30?l进样，按“2.1”项下色谱条件进行检测。结果供试品溶液中黄芩苷和连翘苷与杂峰完全分离，阴性样品溶液无干扰。(谱图见图1)
A、B-对照品(1-黄芩苷； 2-连翘苷)；C-供试品；D-.阴性样品；
2.4 线性关系考试验 分别取“2.2.1”的黄芩苷和连翘苷混合对照品溶液，加50%甲醇制成每1mL含黄芩苷0.33?g、连翘苷0.086?g的混合对照品溶液，作为系列浓度的对照品溶液。依次自动进样5、10、15、20、25μL，记录色谱图。以对照品进样量X (μg)为横坐标，峰面积Y 为纵坐标，进行线性回归 ......
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