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编号:12129800
HPLC法测定妇科洗中蛇床子素的含量
http://www.100md.com 2011年10月15日 吴昭璇 陈惠红
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    参见附件(2203KB,2页)。

     【摘 要】 目的:建立妇科洗中蛇床子素的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,用Shimpack VP-ODS C18柱(150mm×4.6mm,5μm),以乙腈-水(62∶38)为流动相,流速:1.0 mL/min,检测波长为323nm。结果:蛇床子素在1.35~32.4μg/mL呈良好的线性关系(r =0.9999),平均回收率为98.52%,RSD=1.36%。结论:所建方法准确可靠,操作简便,稳定性好,可用于妇科洗的质量控制。

    【关键词】 HPLC法;妇科洗;蛇床子素

    Content determination of Osthole in Fukexi by HPLC

    WuZhaoxuan ChenHuihong

    (Department of Pharmacy,Liuzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Liuzhou 545001,China)

    【Abstract】 Objective To establish an content method determination of Osthole in Fukexi. Methods The HPLC with a Shimpack VP-ODS C18 column(150mm×4.6mm,5μm) was used and the mobile phase consisted of methanol-water (62∶38) at the flow rate of 1.0 mL/min .The UV-detection wave length was set at 323nm. Results The linear range of Osthole was 1.35~32.4μg/mL (r =0.9999).The recovery was 98.5 2%,and the RSD=1.36%. Conclusion The method is simple accurate and stable, and it can be used for the quality control of Fukexi.

    【Key words】HPLC; Fukexi; Osthole

    妇科洗是我院自制制剂,由黄柏、苦参、蛇床子、鱼腥草等中药组成,具有清热燥湿、泻火解毒、杀虫止痒等功效。原定标准中只对中药成分定性鉴别,为有效控制本品质量,对方中主药蛇床子的有效成分蛇床子素进行含量测定研究。

    1 仪器与试药

    LC-20A高效液相色谱仪,SPD-20A紫外检测器,LC-20AT输液泵,LCsolution工作站(日本岛津公司);AL204电子天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司);双频数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);UV-1601紫外可见分光光度计(日本岛津公司)。

    蛇床子素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110822-200305,供含量测定用);乙腈为色谱纯;水为纯化水;其他试剂均为分析纯 。妇科洗(规格:250ml/瓶,柳州市中医院制剂室制备)。

    2 方法与结果

    2.1 色谱条件

    色谱柱:Shimpack VP-ODS C18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-水(62∶38),流速:1.0mL/min,柱温:30℃,检测波长为323nm,理论塔板数按蛇床子素峰计算应不低于3000。

    2.2 测定波长选择

    取蛇床子素对照品适量,加乙醇使溶解,用紫外分光光度计于200-400nm范围内扫描,结果表明,蛇床子素对照品在323nm波长处有最大吸收峰,因此选择波长323nm为测定波长。

    2.3 对照品溶液的制备

    取蛇床子素对照品适量,精密称定,加乙醇制成每1ml含0.054mg的溶液,即得。

    2.4 线性关系考察

    精密吸取对照品溶液0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00mL于10mL量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取20μL进样,按“2.1”项下的色谱条件,以浓度C(μg/mL)为横坐标,峰面积A为纵坐标进行线性回归分析,得回归方程:A=84974C+8431 ,r=0.9999,结果表明蛇床子素在1.35~32.4μg/mL 范围内线性关系良好。

    2.5 供试品溶液的制备

    精密量取本品50ml,水浴蒸干,加95%乙醇20ml,溶解,超声10min,定容至25ml,即得。

    2.6 阴性对照溶液的制备

    取不含蛇床子的处方药材,按妇科洗的制备方法制备阴性样品,精密量50ml,照供试品溶液的制备方法,制备阴性对照溶液。

    2.7 阴性干扰试验

    按“2.1”项下的色谱条件,分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μL进样测定,结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上有一相同保留时间的色谱峰,而阴性对照溶液无干扰,见图1。

    A B C

    图1 高效液相色谱图

    A. 蛇床子素对照品;B.样品;C.阴性对照;1.蛇床子素

    Fig 1 HPLC chromatograms

    A. Osthole reference substance; B. sample ;

    C. negative control;1. Osthole

    2.8 精密度试验

    取同一浓度对照品溶液20μL,按“2.1”项下的色谱条件,重复进样6次,测得峰面积的RSD为0.85%,结果表明仪器精密度良好。

    2.9 稳定性试验

    取同一供试品溶液,分别在放置0、1、2、4、8、12h后,依法测定,结果RSD为1.8%,表明供试品溶液在12h内稳定。

    2.10 重复性试验

    取同一批号样品,精密量取6份,每份50ml按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液,按“2.1”项下的色谱条件测定,计算含量,RSD为1.54%。

    2.11 加样回收率试验

    精密量取已知含量的样品6份,每份25ml,各精密加入蛇床子素对照品,按“2.5”项下方法处理后,再按“2.1”项下色谱条件进样测定,各进样20μl,测得蛇床子素峰面积,计算回收率,详见表1。

    表1 回收率试验结果

    Tab1 Results of recovery test

    取样量

    (ml)样品 ......

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