川芎嗪对静脉注射油酸方法建立急性肺损伤模型大鼠肺组织的保护作用及机制(2)
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参见附件(3730KB，3页)。
1.2.5 免疫组织化学染色观察肺组织中p38MAPK的表达
取部分右肺下叶组织，4%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋切片，脱蜡水化。一抗采用兔抗p38MAPK多克隆抗体(武汉博士德生物工程有限公司)，湿盒中37℃孵育90 min。SP免疫组化试剂盒、DAB均为武汉博士德生物工程有限公司产品。光镜下观察，以细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性信号，阴性对照用PBS代替一抗。每组随机选取5张切片，每张切片随机选取5个不重叠的视野(×400)，于NiKon光学显微镜下进行定性观察。应用形态学图像分析系统软件进行平均光密度(OD值)的测量，计算5个视野OD值的均值来代表该切片的平均OD值。
1.3 统计学处理
应用SPSS 13.0软件进行统计学分析。数据以均数±标准差( ±s)表示，单因素方差分析(One-Way ANOVA)进行组间比较，以P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 光镜下观察肺组织形态学改变
Control组肺组织结构正常，肺泡壁薄，肺泡内无出血；OA组肺泡间隔增宽，大量炎细胞浸润，肺泡腔出血，肺泡壁断裂；应用TMP或DEX后肺水肿明显减轻，肺泡腔出血及炎细胞浸润减少(图1)。
2.2 肺组织丙二醛(malonaldehyde，MDA)含量的测定
与Control组相比，OA组肺组织中MDA含量明显升高(8h时最高, P<0.05)；应用TMP和DEX后肺组织MDA含量显著降低，但仍高于Control组(P<0.05，表1)。
Tab.1 Effect of different treatments on content of
MDA (nmol/mg protein) in the lung tissue of rats ( ±s, n=6)
GroupMDA content
1h4h8h
Control2.65±0.272.72±0.182.70±0.25
OA
TMP+OA9.62±0.84*
6.39±0.92#13.75±1.26*
7.58±1.10#16.56±2.27*
7.92±1.10#
DEX+OA6.17±0.77#7.25±1.08#7.74±0.96#
*P<0.05 vs control group; #P<0.05 vs OA group
2.3 肺组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性测定
与Control组相比，OA组肺组织中SOD活性显著降低(8h时活性最低, P<0.05)；应用TMP和DEX后肺组织SOD活性明显升高，但仍低于Control组(P<0.05，表2)。
Tab.2 Effect of different treatments on activity of SOD
(NU/mg protein) in the lung tissue of rats ( ±s, n=6)
GroupSOD activity
1h4h8h
Control113.83±3.69120.43±6.12117.68±4.28
OA
TMP+ OA80.51±4.73*
102.78±5.63#72.26±3.17*
93.92±8.06#68.28±5.65*
90.15±3.42#
DEX+ OA96.65±6.48#90.87±4.91#85.35±2.57#
*P<0.05 vs control group; #P<0.05 vs OA group
2.4 免疫组织化学染色观察肺组织中p38MAPK的表达
Control组可见反应较弱的p38MAPK阳性细胞；OA组p38MAPK阳性细胞较对照组明显增多(8h时达到高峰，P<0.05)，主要分布于支气管内皮细胞、血管内皮细胞、肺泡上皮细胞、浸润的炎症细胞；应用TMP和DEX后肺组织中阳性细胞分布与OA组类似，但阳性信号明显减弱(P<0.05，图2，表3)。
Tab.3 OD value of the expression of p38MAPK at 1 h, 4
h and 8 h after OA infusion in the lung of rats ( ±s, n=5)
GroupOD value
1 h4 h8 h
Control
OA
TMP+OA
DEX+OA0.20±0.03
0.36±0.02*
0.30±0.04#
0.29±0.03#0.22±0.03
0.42±0.05*
0.33±0.02#
0.31±0.02#0.21±0.04
0.50±0.06*
0.34±0.03#
0.32±0.05#
*P<0.05 vs control group; #P<0.05 vs OA group;
3 讨论
ALI的发病机制很复杂，至今还未完全阐明，故其治疗目前在临床上依旧面临很大的挑战。研究[5]显示肺组织内中性粒细胞(PMN)浸润是引发损伤的关键。活化的PMN释放大量氧自由基(OR)，引起弥漫性肺泡损害，最终导致ALI[6]。MDA是氧自由基攻击生物膜中多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化(lipid peroxidation)而形成的脂质过氧化物，它的分解产物又能引起细胞的损伤，MDA含量常作为评定氧化应激反应和对细胞膜结构破坏的指标 ......
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