HPLC测定左金丸中吴茱萸次碱的含量
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【摘要】 目的：建立左金丸中吴茱萸次碱含量的测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定左金丸中吴茱萸次碱含量。色谱柱: 20RBAX Eclipse XDB-Cl8(4.6 mm×250 mm，5μm)；流动相:乙腈-水-四氢呋喃-冰醋酸(6:5:0.9:0.1)；检测波长:345 nm；流速:1.0 mL·min-1；进样量:10μL；柱温:30 ℃。结果：吴茱萸次碱在0.292～2.920μg(r =0.999 5)范围内线性关系良好。回归方程为：Y =29 630X +3 525.3,r =0.999 5，吴茱萸次碱的平均回收率为99.65%，RSD为0.69%。结论：本方法简便可行、重复性好，可作为左金丸中吴茱萸次碱的含量测定方法。
【关键词】 HPLC；左金丸；吴茱萸次碱；含量测定
左金丸收载于2010年版《中国药典》一部，由黄连、吴茱萸两味中药组成，具有泻火，疏肝，和胃，止痛之功。用于肝火犯胃，脘胁疼痛，口苦嘈杂，呕吐酸水，不喜热饮[1]。是临床上治疗胃脘疼痛的常用中药丸剂。原标准中无吴茱萸有效成分的含量测定项，为了保证上市药品的质量与疗效,本实验建立了制剂中吴茱萸的主要有效成分吴茱萸次碱的含量测定方法，为左金丸的质量控制提供参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器 高效液相色谱仪(Waters2487检测器、Waters600色谱泵)、JA2003型电子天平(上海良平仪器仪表有限公司)、HH-4型数显恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司)、WND-200粉碎机(四川省锦华机电商贸有限公司)。
1.2 试药 吴茱萸次碱对照品(中国药品生物制品检验所提供，供含量测定用，批号：110802)、左金丸(贵阳中医学院新制剂开发中心提供，批号：100510、100511、100512)、乙腈(色谱纯，天津市科密欧化学试剂开发中心，批号：20060112)，水为超纯水(批号：20100710、20100815)；四氢呋喃(色谱纯，TEDIA，USA，LOT408100)；冰醋酸(分析纯，广州化学试剂厂产品，批号071102-24)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[2]：色谱柱: 20RBAX Eclipse XDB-Cl8(4.6 mm×250 mm，5 ? m)；流动相:乙腈-水-四氢呋喃-冰醋酸(6:5:0.9:0.1)；流速:1.0 mL·min-1；柱温:30 ℃；进样量:10μL；检测波长:345 nm。
2.2 样品溶液的制备
2.2.1 吴茱萸次碱对照品溶液的制备 精密称取吴茱萸次碱对照品3.650mg，置25 mL的容量瓶内，加甲醇溶解定容,即得0.146 mg·mL-1的吴茱萸次碱对照品溶液，备用。
2.2.2 复方供试品溶液的制备 精密称取左金丸1.0 g,加乙醇回流提1 h ,取出，滤过，滤液置恒温水浴锅上蒸干，加甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶中，取溶液过0.45μm微孔滤膜为复方供试品溶液。
2.2.3 阴性对照品溶液的制备 取缺吴茱萸的处方药材，按照2.2.2项下同法操作，即得阴性对照品溶液。
2.3 系统适应性试验 分别取阴性对照溶液、吴茱萸次碱对照品溶液、复方供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件进行检测，记录色谱图，结果供试品溶液色谱在与对照品溶液色谱相应的位置有吸收峰；而阴性对照溶液色谱图在吴茱萸次碱峰位置处无吸收峰出现，表明阴性样品对测定无干扰，分离度大于1.5，分离效果好，理论塔板数不低于3 000。其HPLC图见图 1 。
图1 对照品、供试品及阴性样品溶液的HPLC图
A、吴茱萸次碱对照品 B、供试品溶 C、液阴性对照
2.4 线性范围的考察 分别精密吸取对照品溶液2,4,8,12,16,20μL分别注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件测定峰面积，以吴茱萸次碱进样量(μg)为横坐标，以峰面积值A为纵坐标，绘制标准曲线，计算其回归方程为：Y =29 630X +3 525.3,r =0.999 5。结果表明，吴茱萸次碱在0.292～2.920μg(r =0.999 5)范围内线性关系良好。结果见表1，标准曲线图见图2。
2.5 精密度试验 精密吸取吴茱萸次碱对照品溶液10μL,重复进样5 次,记录峰面积,结果精密度良好，RSD为1.2%。结果见表2。
表2 精密度试验结果(n=6)
2.6 重复性实验 取同一批左金丸6 份，分别按3.2项下供试品溶液的制备方法制备6 份供试品溶液，按上述色谱条件操作，测定，结果表明：重复性实验良好，RSD为 2.3%。结果见表3。
表3 重复性试验结果(n=6)
2.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别于0,2,4,6,8,12,2
4h，进样，测定其峰面积，结果表明：供试品溶液在24 h内峰面积变化较小,RSD为1.5%,稳定性良好。结果见表4。
表4 稳定性试验结果(n=7)
2.8 加样回收率实验 精密称取已知含量样品1.0 g(含吴茱萸次碱0.3 mg·g-1)，共称取9份，分别加入样品中吴茱萸次碱含量的80%，100%，120%的对照品溶液，每个浓度做三个平行样，按供试品的制备方法制备供试品溶液。分别进行含量测定，计算含量，其吴茱萸次碱的平均回收率为99.65%，RSD为0.69%，回收率良好。结果见表5。
表5 回收率试验结果表(n=9)
2.9 样品测定 分别称取6 批不同批号的左金丸样品，按2.2.2样品溶液制备方法项下制备，精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪 ......
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