炮制时间对何首乌中有效成分的影响
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【摘要】 目的: 探讨炮制时间与制首乌内在质量的关系。方法: 用偏光显微镜观察了淀粉粒在何首乌炮制过程中的变化并比较何首乌各炮制品的蒽醌类成分、总糖、卵磷脂 、二本乙烯苷、水溶性浸出物的含量。结果：采用同一种炮制方法炮制，随着蒸制时间增加，水溶性浸出物的含量不断增加，何首乌中结合蒽醌含量越来越低，游离蒽醌、总糖、卵磷脂等成分的含量在一定蒸制时间范围内随着蒸制时间的增多而增加，二苯乙烯苷的含量随着蒸制时间的增加而逐渐降低，以笼屉蒸48h含量最高，随后各成分的含量有所下降。结论: 何首乌作为补益药应用时采用笼屉蒸48h炮制品较好。用偏光显微镜观察了淀粉粒在何首乌炮制过程中的变化,能有效控制何首乌炮制品的质量。
【关键词】 何首乌；不同炮制方法；质量标准；探讨
何首乌为临床常用中药，生品长于解毒散结，润肠通便;蒸制后可消除令人致泻的副作用， 增强补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨的功效。何首乌多以制首乌入药，何首乌的炮制，药典有蒸法、炖法，历代以黑豆为辅料炮制，炮制时间也可参考“煮熟”、“煮透”乃至“九蒸九晒”。成分主要有卵磷脂、蒽醌衍生物、二苯乙烯苷类化合物，淀粉、脂肪、矿物质、糖类等成分。二本已烯苷具有降低胆固醇和保肝作用，卵磷脂能促进血液细胞的生长发育，为其补肝肾，益精血的主要成分，总糖及还原糖具有滋补作用，结合蒽醌衍生物可促进肠管的蠕动以通便，游离蒽醌衍生物具有补益作用，能抑制肠道对胆固醇的再吸收。中药炮生为熟引起的药性改变与其内在物质基础的变化有关，以往不少何首乌炮制的研究报道大多用单一成分为指标，单纯一种成分的变化并不能全面解释整个单味中药饮片功效的改变。为说明炮制引起化学成分的变化，本文全面考察了用笼屉常压蒸制不同时间制得的何首乌炮制品中游离蒽酯、结合蒽醌、总糖、卵磷脂以及二苯乙烯苷类成分的含量及其变化规律并对何首乌各种炮制品样品进行炮制效果的比较，探讨现代炮制方法和炮制时间对何首乌炮制品质量的影响，同时分析炮制过程中有效成分的变化，为何首乌炮制工艺研究提供参考和依据。
1 药材、仪器与试剂
1.1 实验药物 何首乌购于湖南省药材公司，经我校周煌辉教授鉴定为正品。黑豆市售。
1.2 实验仪器 7520型可见-紫外分光光度计(上海分析仪器厂);Waters 液相色谱仪,600 泵,2487 双波长紫外检测器，JJ系列电子天平，索氏提取器，XYZ-802离心沉淀机。
1.3 实验试剂 硫酸、无水乙醇、无水葡萄糖、苯酚、钼氨酸、无水醋酸钠、抗坏血酸、高氯酸、氯仿、甲醇均为国产分析纯试剂，大黄素对照品购于中国药品生物制品检验所，批号110756-200110，卵磷脂对照品为SIGMA公司产品，EC NO 232-307-2二苯乙烯苷对照品购于中国药品生物制品检验所，批号0844-20003。
2 方法与结果
2.1 各何首乌炮制品的制备(详见表1)
2.2 生品及4种炮制品均在50℃温度下干燥4h,粉碎，过40目筛，备用。
2.3 用偏光显微镜测定淀粉粒在炮制过程中的变化及何首乌各炮制品的水溶性浸出物的含量：按《中国药典》2010年版附录药材成方制剂显微鉴别法，用偏光显微镜观察淀粉粒形态和偏光现象。按《中国药典》2010年版附录水溶性浸出物测定法(冷浸法)测定水溶性浸出物含量。实验结果见表2 。
2.4 蒽醌类化学成分的含量测定
2.4.1 标准曲线的绘制：精密称取大黄素对照品8mg，加甲醇并定容为10ml.精密吸取此对照品溶液20μL，40μL，80μL，120μL，160μL，分别加0.5%醋酸镁甲醇液至10mL,摇匀，于510nm测定吸收度，绘制浓度—吸收度曲线，回归方程为：C(μg/mL)＝15.31A-0.26
r＝0.999
2.4.2 供试品溶液的制备：取生首乌及各何首乌炮制品粗粉各1g,用50mL甲醇回流提取完全，提取液平分为2份，加冰醋酸—25%盐酸(10:2)20Ml,沸水浴水解2h,酸液用绿仿翠取5次，合并绿仿液，浓缩至干，残渣加0.5%醋酸镁甲醇溶液溶解，显色，定容至100ml作为测定总蒽醌的供试品溶液；另一份水浴蒸干，用20mL乙醚回流提取3次，挥去乙醚，残渣甲醇溶解并稀释至100Ml,作为测定游离蒽醌的供试品溶液。
2.4.3 样品的测定：取上述供试品溶液，照标准曲线项下方法测定，计算，即得，结果见表3
2.5 卵磷脂含量的测定 精密称取生何首乌，各制首乌粗粉0.2g,准确加入5mL氯仿—甲醇(5:1)混合溶剂，回流提取，按文献[1]比色法测定计算卵磷脂含量。结果见表3.
2.6 二苯乙烯苷含量的测定。实验结果见表3 。
采用薄层扫描法[2]3]，以生首乌含量为100%，各何首乌炮制品：笼屉蒸72h何首乌、笼屉蒸48h何首乌、笼屉蒸24h何首乌、笼屉蒸12h何首乌等控制薄层总样量，以其适当面积与生品对照计算出相对百分含量。
2.7 总糖含量测定方法。实验结果见表3 。
表1 5种何首乌炮制品
表2 用偏光显微镜测定淀粉粒在炮制过程中的变化及何首乌各炮制品的水溶性浸出物的含量
表3 何首乌不同炮制品有效成分含量测定结果(%)
3 结果
何首乌不同炮制品有效成分含量测定结果 何首乌采用同一种炮制方法炮制，随着蒸制时间的增多，总蒽醌的含量逐渐降低 ，游离蒽醌含量先升后降，各何首乌炮制品含游离蒽醌含量从小到大的顺序是：笼屉蒸12h组<笼屉蒸24h<笼屉蒸72h<笼屉蒸48h，以高压锅蒸7h组游离蒽醌含量最高，结合蒽醌含量逐渐降低，具有补益作用的卵磷脂、总糖等成分的含量在一定蒸制时间范围内随着蒸制时间的增多而增加，以笼屉蒸48h含量最高，随后含量有所下降。二苯乙烯苷的含量随着蒸制时间的增加而逐渐降低，以何首乌生品含二本乙烯苷成分最高。
4 讨论
4.1 用偏光显微镜测定淀粉粒在炮制过程中的变化及何首乌各炮制品的水溶性浸出物的含量 淀粉粒在何首乌炮制过程中的变化是：用生物显微镜观察，生何首乌中可见大量的淀粉粒，随着蒸制时间的增加，淀粉粒逐步聚合成团，最后特底糊化消失。由于普通显微镜下淀粉粒与周围组织反差较小，尤其是半糊化的淀粉粒不易观察，因此，我们用偏光显微镜观察了淀粉粒在何首乌炮制过程中的变化，结果是：原生药中可见大量的淀粉粒，偏光图像清晰可见明显对称的黄蓝两色，随着蒸制时间的增加，笼屉蒸12h淀粉粒开始变形，部分有偏光现象。笼屉蒸24h淀粉粒开始糊化，偶见偏光现象，笼屉蒸48h及笼屉蒸72h未见淀粉粒。从表2可以看出何首乌炮制品，何首乌各炮制品中，笼屉蒸48h何首乌的成品性状符合药典规定，未见淀粉粒，笼屉蒸72h何首乌炮制品，颜色暗淡，无光泽，质疏松，显然蒸制太过。笼屉蒸12h及笼屉蒸24h何首乌炮制品，外表红棕色或黑褐色，但断面红棕色，部分呈粉性，用偏光显微镜检查可见大量淀粉粒，显然未制透。从表2同时可以看出，随着蒸制时间增加，水溶性浸出物的含量不断增加。以笼屉蒸48h含量最高 ......
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