血糖试剂盒测量结果不确定度分析
 |
| 第1页 |
参见附件。
【摘要】 目的：本文探索了血糖试剂盒的不确定度分析方法。方法：不确定度(Uncertainty)是指由于测量误差的存在而对被测量值不能确定的程度[1]，在紫外分光光度计上，使用有证参考物质对血糖试剂盒进行重复10次定标，确定出每个定标点的吸光值变化范围，然后将两个定标点的范围进行两两组合，得出四条典型的定标曲线，然后再对已知靶值的检测物进行重复测量，计算得到标准偏差，然后根据误差传递公式计算出测量不确定度。结果：本文针对血糖试剂盒定标的特点，提出了一个适用于解决体外诊断试剂测量不确定度的方法，使用这一方法得出血糖试剂盒测量样品浓度为7.35 mmol/l时的不确定度为10.9%，测量9.8 mmol/l时为12.1%。 结论：确定体外诊断试剂不确定度的一项重要内容是计算校准过程引入的误差，本文提供的计算校准过程引入误差的方法，可增强IVD试剂溯源过程的可操作性。
【关键词】 血糖试剂盒；体外诊断试剂；不确定度分析；溯源
随着临床生化检验工作量的日益增大，不少检验科出现了两种或多种检测系统(方法、仪器、校准品、试剂)对同一项目的检测，尤其以非配套的试剂、校准品的广泛应用，往往使检测结果差异较大[2]，这些差异可能导致诊断误差，严重时会给患者带来难以估量的伤害。解决不同检测系统结果差异之根本：是将测量系统使用的参考物质溯源至统一的最高的标准，只有这样才能使检测结果不论在何时何地都具有可比性。
溯源是通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性[VIM：1993，定义6.10]。溯源测量不确定度表示指南(GUM)是由国际标准化组织(ISO)、国际电工委员会(IEC)、国际计量局(BIPM)、国际法制计量组织(OIMI)、国际理论化学与应用化学联合会(IUPAC)、国际理论物理与应用物理联合会(IUPAP)、国际临床化学联合会(IFCC)等7个最具权威性的国际学术团体联合公布的标准。我国在1999年将其等同转换为国家标准，编号为JJF 1059—1999。根据这一标准测量不确定度的定义是：表征合理赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数。本文在紫外分光光度计上，使用有证参考物质对血糖试剂盒进行重复10次定标，确定出每个定标点的吸光值变化范围，然后将两个定标点的范围进行两两组合，得出四条典型的定标曲线，然后再对已知靶值的检测物进行重复测量，计算得到标准偏差，然后根据误差传递公式计算出测量不确定度。
血糖属于临床病人和健康人体检的常规项目，不仅用来诊断糖尿病，也是多种疾病鉴别和诊断的重要指标。血糖测定方法很多，迄今为止大体可分为四类:氧化还原法、缩合法、酶法及其他，目前自动生化分析仪最常用的还是酶法。
本文尝试对DENUO血糖试剂盒的测量进行不确定度分析，验证其检测性能。
1 材料与方法
Biorad 20ul移液器；eppendorf 200ul、1ml移液器，岛津UV2450 紫外分光光度计，RANDOX定标品2351(lot:515UE)；超纯水自制，已糖激酶法试剂盒(DENUO品牌 上海执诚生物科技股份有限公司提供 Lot:AUGK022 有效期至2012年7月)
2 结果与讨论
2.1 定标曲线参数不确定度分析：
2.1.1 使用eppendorf 1ml移液枪每次取R1 1 ml试剂，取2次，取R2试剂500ml，1次；然后再用Biorad 20ul移液枪取20ul纯化水，然后进行比色分析。以上操作重复10次。
2.1.2 重复以上操作，只是将水更换成定标液(靶值14.7mmol/l不确定度为2.4%)。
在紫外分光光度计上的分析结果见表1。
表1：在紫外分光光度计上检测样本吸光值(1cm光径，主波长340nm；副波长380nm)
2.1.3 计算定标方程参数的不确定度。
标准品的不确定度为2.4%，所以标准品的浓度范围为：14.35~15.05 mmol/l，即标准品的浓度可能是这个范围中的任何值。
空白与标准品的吸光值及其浓度是定标过程的关键点，所以它们的不确定度必然传递到定标方程上，即每个方程参数都会有不确定度。然后这个方程又将其不确定度传递给测量过程。因此对定标方程的不确定度计算，是非常必要的，但是目前体外诊断试剂的溯源过程还没有注意到这个情况。
不确定度计算是在一定概率下成立的，以下计算过程的误差概率。在本文将空白吸光值的区间两端与标准品的区间两端，分别与样本浓度配对进行回归分析，得到具有代表性的八个回归方程y＝aix+bi，然后通过计算，得到两个方程参数的估计区间。
表2.方程参数及其区间估计(α＝0.05)
2.2 样本的不确定度分析 制备样本1，使用Biorad 20ul移液枪，取20ul水，再加入20ul前述校准品，得到样本1；再取20ul水，加入40ul前述校准品，得到样本2，由于操作过程和校准品都会引入不确定度，因此需要根据不确定度传递(见公式1)计算，制备的样本血糖含量的不确定度见表3。 公式1Uc(y)＝■
表3.样本计算值及区间范围
2.3 讨论
2.3.1 本次对血糖试剂盒进行不确定度计算时，使用了以下假设 即：纯化水含有极微量的葡萄糖分子，在检测过程中不引入误差。
2.3.2 定标过程可以消除系统误差，所以仪器和环境造成的系统误差不影响本次不确定度计算。
2.3.3 试剂的不确定度反映了分析结果的分散性，本文将其解释为：在某概率下，可能的测量值与可能的真实值之间最大的差距，这一阐释在没有违背原定义的情况下，使溯源过程更加容易理解，增强了IVD试剂溯源过程的可操作性。
2.3.4 不同的样本，由于操作过程不同，样本检测结果的不确定度也不同，因此每个点的不确定度不应该相同，另外不同的人和不同的环境或者使用不同批号定标品在进行不确定度测量时，由于引入的误差不同，因此得出的不确定度值也会不同。
2.3.5 本文虽然计算的是试剂的不确定度，但是检测过程必然会引入误差，所以不可能将试剂的不确定度从总的不确定度中分割开，不可能得到试剂本身的不确定度。另一方面，使用的仪器设备的不确定度越小，得到的不确定度越接近试剂本身的不确定度。
2.3.6 本文在测量不确定时，已经引入了RANDOX定标品的不确定度 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(2560kb)。