前列地尔脂微球制剂对犬肝动脉碘油栓塞后的保护作用
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【摘要】 目的：探讨前列地尔脂微球制剂(Lipo-PGE1)对犬肝动脉栓塞后的保护作用。方法：将动物随机分为三组，肝动脉内注入生理盐水为空白组(A组)，肝动脉内注入碘化油为对照组(B组)，肝动脉内注入碘化油+前列地尔为治疗组(C组)，观察丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase，ALT)、天冬氨酸转移酶(Aspartate aminotransferase，AST)及乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase，LDH)等指标，肝组织病理检查。结果：治疗组各项生化指标高于生理盐水组，但低于碘化油组。病理学检查治疗组肝组织坏死较碘化油组轻。结论：Lipo-PGE1能改善肝动脉碘油栓塞后的肝功能。
【关键词】 Lipo-PGE1；肝动脉栓塞；犬
经导管肝动脉化疗栓塞(TACE)是原发性肝癌的有效治疗方法之一[1],但TACE对正常肝组织有不同程度的损伤。所以TACE后肝脏的保护是临床工作的重点。本实验旨在探讨经肝动脉注射Lipo-PGE1对肝动脉碘油栓塞后肝损伤的保护作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组 选用健康家犬30只，犬龄12-15个月，体重25公斤左右，由哈尔滨医科大学动物实验中心提供。将实验动物随机分为生理盐水组、超液态碘化油组及前列地尔组，生理盐水组自肝动脉注入10ml生理盐水，超液态碘化油组自肝动脉注入10ml碘化油，前列地尔组自肝动脉注入10ml碘化油及2ml前列地尔。
1.2 药物及试剂 前列地尔脂微球制剂(Lipo-PGE1，商品名凯时)，10μg/2ml/支，北京泰德制药有限公司。优维显，300毫克碘/毫升。超液化碘油，含碘37-41%。戊巴比妥钠，上海(进口分包装)，用蒸馏水配制成3%浓液。阿托品，0.5mg/ml/支。
1.3 实验仪器1000mADSA数字减影机，西门子公司制造。导管导丝，新力医疗器械公司。全自动生化分析仪，瑞士Rocbe(规格：RACN)。显微镜，日本NICKON。
1.4 实验方法 实验犬称重后固定在DSA床上，皮下注射3%戊巴比妥钠2ml/kg，皮下注射阿托品一支防止唾液分泌过多而窒息，以右后肢根部为手术野备皮消毒，利用Seldinger’s技术行右侧股动脉穿刺置管、超选择性肝动脉造影，确定无肝动脉变异后，将导管置于肝右动脉进行如下操作：生理盐水组注入10ml生理盐水，碘化油组注入10ml超液化碘化油，治疗组注入10ml超液化碘化油及2ml前列地尔(注射前必须将前列地尔与超液化碘化油充分混匀)，2min左右推注完(须防止药物返流)。注射完毕后撤出导管，局部加压包扎。实验结束后第1d、第3d及第5d抽取静脉血2ml，测血液生化检查。第7d后处死动物，任取肝右叶内4块组织(大小约2cm*2cm*0.2cm)行病理学检查。
1.5 统计学方法 各项实验结果以均数±标准差(x±s)表示，用SPSSl3.0统计软件进行数据处理，采用单因素方差分析，若各组间有差别，进一步用Dunnett方法作多个样本间均数两两比较。对两个样本均数的比较，采用t检验。
2 结果
2.1 生化指标 与生理盐水组比较，治疗组及碘油组生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)于第一天明显增高，P<0.05，有显著意义。治疗组各生化指标第3d开始下降，第5d接近正常，与碘油组比较，P<0.05，差别显著。
2.2 病理结果
2.2.1 大体观察：生理盐水组肝脏形态、大小、质地、颜色、包膜未见明显异常。治疗组肝脏稍增大，质地较软，肝脏表面可见散在斑点状颜色变淡区。碘油组肝脏稍增大，质地柔软，肝脏表面弥漫直径1-2mm坏死区，颜色较淡。
2.2.2 光镜观察 生理盐水组：肝板和肝细胞索排列整齐有序，肝细胞呈多角形，汇管区及小血管周围肝细胞少量脂肪变性及气球样变，小血管内无血栓形成。治疗组肝细胞变性，肝细胞体积增大，排列紊乱，肝窦受压变窄，肝小叶中央可见点状坏死灶，汇管区及小动脉周围少量中性粒细胞浸润，小动脉内纤维血栓形成及少量碘油积聚(如图1-2。碘油组散在碎片状坏死，肝小叶及汇管区大量中性粒细胞浸润，小动脉内血栓形成及碘油积聚(如图3-4)。
图1 H&E染色 放大倍数10×40肝细胞脂肪变性 图2 H&E染色 放大倍数10×40 中央静脉附近少量肝细胞坏死(点状坏死)
图3 HE染色 放大倍数10×40小动脉内纤维血栓 图4 HE染色 放大倍数10×40肝小叶内碎片状坏死灶
3 讨论
与生理盐水组比较，前列地尔组与碘油组的生化指标均有先升高后下降趋势，但在同一时间前列地尔组的各项生化指标均低于碘油组(P<0.05)，提示前列地尔组的肝功能损伤较碘油组轻。生理盐水组的肝脏病理表现接近于正常，碘油组的肝组织坏死明显——碎片状坏死、肝小叶及汇管区大量炎细胞浸润、小动脉内血栓形成，而前列地尔组的肝组织坏死相对较轻——肝小叶中央点状坏死、肝小叶及汇管区少量炎细胞浸润。生化指标及病理观察均提示前列地尔组的肝损伤比碘化油组的肝损伤要轻，证实前列地尔对肝动脉栓塞后的肝组织有保护作用。
TACE后肝损伤的机制主要为化疗药物的毒性及栓塞所致的肝组织缺血缺氧，其中肝组织缺血缺氧是主要原因[2]。PGE类药具有扩张血管、抑制血小板聚集等作用，PGE2在肝脏方面的保护作用主要有：改善肝脏微循环、促进肝细胞再生、抑制肝纤维化等[3]。其具体机制尚未明确，可能有以下几方面：增加靛氰氯清除率，抑制T-细胞介导的细胞毒作用，通过刺激肝组织cAMP的产生、增加ATP的水平而增加损伤肝脏DNA的合成，加速再灌注后线粒体呼吸功能的恢复，降低胞浆膜的微粘度等[4]。
肝动脉与门静脉存在以下四个交通途径[5]：胆管周围血管丛；门静脉滋养血管；动-门脉直接交通；动-门脉末梢血管在肝窦内的“功能性”吻合。经肝动脉注入的碘化油大部分蓄积在肝内，少量碘化油可通过以上途径进入全身血液循环。进入血液循环的碘化油大部分在肺及肾脏蓄积，而Lipo-PGE1跟碘化油充分混匀后可以跟随碘化油进入血液循环，与碘化油一起蓄积在肝外组织，保护受碘化油损伤的组织。
传统使用的PGE1为粉针剂(PGE1-CD)，须经静脉滴注，通过血液循环一次在肺部失活达60-90%[6]，为了达到治疗目的必须加大剂量，但显著的副作用限制了其在临床的大剂量应用。本实验所用的PGE1为PGE1的脂微球制剂(Lipo-PGE1)，是将PGE1封入直径为0.2μm的脂微球中。脂微球是理想的药物载体，对病变血管有靶向作用，易在病变部位聚集。而且经肝动脉注射Lipo-PGE1，Lipo-PGE1在碘化油栓塞的肝组织内积聚，既能直接发挥作用又能减少Lipo-PGE1用量。所以，与传统粉针剂PGE1相比，经肝动脉注射的Lipo-PGE1能大大减少在肺部的失活，与病变部位接触时间延长从而充分发挥作用，而临床使用剂量的减少可降低副作用的发生率。
参考文献
[1]白莉 ......
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