超滤-HPLC法测定奥沙利铂脂质体的包封率
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【摘要】目的:测定奥沙利铂脂质体的包封率。方法:采用超滤法分离脂质体中游离药物；用HPLC测定脂质体的包封率。结果:超滤能较好地把脂质体和游离药物分离，高、中、低浓度平均回收率符合测定要求；在所选色谱条件下，辅料不干扰奥沙利铂的定量测定；本法测定本奥沙利铂脂质体的包封率为92.10%。结论:该方法方便、快捷，可以用于奥沙利铂脂质体包封率的测定。
奥沙利铂是继顺铂和卡铂后的第三代铂类抗癌药[1]，对结肠癌有明显的作用[2]。但在抗癌的同时，也会产生不同程度的毒副作用。把奥沙利铂做成脂质体制剂可以减少其毒副作用。而包封率是脂质体制剂的一个重要指标，本实验旨在对奥沙利铂脂质体包封率的测定方法进行研究，建立了用超滤-HPLC法测定奥沙利铂脂质体包封率的方法，为奥沙利铂脂质体质量评价提供依据。
1仪器与试剂
1.1仪器高效液相色谱仪(日本岛津公司LC-10AT泵，SPD-10A紫外检测器，浙大智达N2000工作站)；765MC紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；RE-2000旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；AH100D均质机(ATS Engineering Inc)；Sartorius BP211D电子天平(德国赛多利斯公司)；Millipore Amicon Ultra-0.5mL 10K超滤离心管(Millipore，Carrigtwohill，Co，Cork，Ireland)；TDL-40B离心机(上海安亭科学仪器厂)。
1.2试药奥沙利铂脂质体(自制)；奥沙利铂(珠海远程医药化工有限公司，批号20110501)；Triton-X100(Amresco，批号20110411)；色谱纯甲醇；其他试剂为分析纯。
2方法与结果
2.1包封率测定方法的选择包封率是脂质体处方工艺筛选和质量标准的重要指标。根据《中国药典》(2010版，附录XIXE微囊、微球与脂质体制剂指导原则)，包封率计算公式如下：
包封率＝■×100%
要测定包封率就要把游离药物分离出来，常用的分离游离药物的方法有：凝胶过滤法、透析法、鱼精蛋白沉淀法、超滤法等[3]。本文采用超滤法对奥沙利铂脂质体的游离药物进行分离，并测定其包封率，操作简单，省时。
2.2色谱条件
色谱柱：Agilent Tc-C18柱(4.6×250mm，5μm)；流动相：甲醇-水(10:90)；流速：1mL·min-1；检测波长：250nm；进样量：20μL；柱温：常温。
2.3专属性试验分别取空白脂质体、奥沙利铂脂质体，破膜并稀释至适当浓度，另取奥沙利铂标准贮备液加水稀释到适当浓度，分别进HPLC，记录图谱，测定结果见图1。如图所示，辅料和溶剂对奥沙利铂脂质体的含量测定没有干扰。
2.4标准曲线的建立取奥沙利铂标准贮备液，分别加水稀释成浓度为0.01,0.02,0.03,0.05,0.1,0.5,1 mg·mL-1的系列标准溶液，分别进HPLC，记录色谱图。以峰面积(A)对浓度(C)进行线性回归，得到回归方程为A=6348070C+13431(n=7)，R2=0.999，结果表明奥沙利铂在0.01~1mg·mL-1范围内峰面积与浓度线性关系良好。
2.5精密度试验取奥沙利铂标准贮备液，加水稀释成浓度为适当浓度的奥沙利铂溶液，分别进HPLC，平行进样6次，记录峰面积，RSD=1.17%。
2.6考察超滤膜对奥沙利铂溶液中药物的吸附能力取奥沙利铂贮备液，分别配制成浓度为0.5,0.2,0.05mg·mL-1的奥沙利铂溶液，各取3份，分别置于超滤离心管中，以3000r·min-1的速度离心2min，弃去初滤液，取续滤液，分别进HPLC。平均回收率分别是101.64%、98.78%、101.04%；RSD分别为2.30%、0.16%、1.29%。
2.7回收率试验分别取1mL空白脂质体于10mL容量瓶中9份，分别加入5mL、2mL、0.5mL奥沙利铂贮备液各3份，加水定容至刻度，摇匀。把上述9个容量瓶中的溶液分别置于超滤离心管中，以3000r·min-1的速度离心2min，弃去初滤液，取续滤液，分别进HPLC。平均回收率分别是94.86%、99.55%、102.57%；RSD分别为1.36%、1.07%、0.66%。
2.8总药物含量的测定精密吸取奥沙利铂脂质体1mL置于10mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取1mL置于10mL容量瓶中，加入1mL10%Triton-X100破膜，加水稀释并定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。进HPLC，测定奥沙利铂脂质体的总药物含量。
3讨论
对于载药脂质体，常用的分离游离药物的方法有：凝胶过滤法、透析法、鱼精蛋白沉淀法、超滤法等。本文采用超滤法对奥沙利铂脂质体的游离药物进行分离 ......
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