分光光度法检测红景天甙的研究
(四川大学食品科学与工程专业，四川 成都，610065)
【摘要】 本实验建立一种以分光光度法测红景天甙的含量的方法，为进一步开发利用红景天提供理论依据。结果表明：样液用1O%醋酸铅溶液2mL和饱和硫酸钠溶液0.5mL去除蛋白质、果胶色素、二元酚等杂质，滤液过D101树脂柱，充分吸附50min。再以15ml7:3二氯甲烷与乙醇混合溶液洗脱，收集洗脱液于蒸发皿。60℃恒温水浴挥干30min，洗涤蒸发皿，滤液至比色皿，定容至10ml，276nm处测吸光度值，根据标准曲线计算出红景天甙浓度，与高效液相所得结果红景天甙含量2.17%最为接近。
红景天拉丁文学名Rhodiola rosea，英文名Roseroot，是景天科多年生草木或灌木植物，其功效成分红景天甙，性味甘、苦、平。具有益气活血、通脉平喘、抗疲劳、提高体力等功能。目前,有关红景天甙的测定方法主要有薄层色谱-紫外和HPLC法，但实验操作复杂、耗时、设备昂贵。本实验采用分光光度法，能快速、简便检测红景天甙浓度，并与高效液相的结果进行比较，并对该方法进行评价。1 标准液的制备：精密称取烘干至恒重的红景天甙对照品15.0mg，置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，即得红景天甙标准溶液，浓度为0.3mg/mL。2 样品溶液的制备：水提红景天去除水不溶性杂质：称取该红景天提取物1.000g，加蒸馏水约100mL，加热至沸腾后煮30min，冷却后，静置12h，离心，弃去沉淀，搜集上清液。醇沉除去醇不溶性杂质：将上清液加热浓缩至30mL，连续搅拌加入无水乙醇120mL，调节料液醇度为75%，得到红景天醇液，常温静置2小时，过滤，弃去沉淀，搜集清液，回收乙醇。将回收乙醇后的滤液定容至100mL，得到样品溶液。3 绘制标曲：分别量取红景天甙标准溶液l，2，3，4，5，6，7，8 mL，置于25 mL容量瓶中，蒸馏水稀释至刻度，摇匀，以蒸馏水作空白，在276nm处测吸光度.以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标，绘制标准线.得红景天甙的线性回归方程为：A=5.1361 c+0.012，r=0.997，线性范围为0.012～0.096mg/mL。标准曲线如图1所示。4 样液处理方法：样液用1O%醋酸铅溶液2mL和饱和硫酸钠溶液0.5mL去除蛋白质、果胶色素、二元酚等杂质，滤液过D101树脂柱，充分吸附30min。再以15ml7:3二氯甲烷与乙醇混合溶液洗脱，收集洗脱液于蒸发皿。60℃恒温水浴挥干60min，洗涤蒸发皿，滤液至比色皿，定容至10ml，276nm处测吸光度值。5 优化过柱条件：5.1 吸附时间：在二氯甲烷：乙醇=7：3，洗脱剂用量为15mL时，考查吸附时间对精制结果的影响，吸附时间分别为20min、30min、40min、50min、60mim。5.2 吸附剂用量：在吸附时间30min，二氯甲烷：乙醇=7：3时，考查吸附剂用量对精制结果的影响，吸附剂用量为5、10、15、20、25mL。5.3 洗脱剂比例：在吸附时间30min，洗脱剂用量15mL时，考查吸附剂比例对精制结果的影响，吸附剂比例为二氯甲烷：乙醇=5:5、6:4、7：3、8: 2、9: 1。5.4 验证实验：由单因素实验得最优过柱条件：吸附时间50min，吸附剂用量15mL，吸附剂比例二氯甲烷：乙醇=7：3，进行验证实验，得红景天甙%为2.644、2.522、2.513，平均2.56%。与高效液相检测结果2.17 %相比，2.56%误差为18%。6 检测方法的评价6.1 精密度实验：五个平行样得红景天甙含量%为2.623、2.775、2.434、2.848、2.604，平均含量2.66%，标准偏差0.16%，小于0.2%，表明本法精密度高。6.2 稳定性实验：吸光度随时间变化不大，表明实验的稳定性好。6.3 加标回收实验：取1 ml供试样品溶液，分别加入0.1、0.2、0.3ml红景天标液，得回收率103.9%、105.5%、103.4%，平均104.3% ，相对标准偏差为1.10%，回收效果较好。7 小结：此方法以水提红景天甙，用分光光度法测定含量，并与高液结果进行比较。通过实验确定，样液用1O%醋酸铅溶液2mL和饱和硫酸钠溶液0.5mL去除蛋白质、果胶色素、二元酚等杂质，滤液过D101树脂柱，充分吸附50min。再以15ml7:3二氯甲烷与乙醇混合溶液洗脱，收集洗脱液于蒸发皿。60℃恒温水浴挥干30min，洗涤蒸发皿，滤液至比色皿，定容至10ml，276nm处测吸光度值，根据标准曲线计算出红景天甙浓度。与高效液相所得结果红景天甙含量2.17%相比，误差为+18%，加标回收率为104%。且此法准确、稳定、简便快捷、重现性好。, 百拇医药(朱冰清)
【摘要】 本实验建立一种以分光光度法测红景天甙的含量的方法，为进一步开发利用红景天提供理论依据。结果表明：样液用1O%醋酸铅溶液2mL和饱和硫酸钠溶液0.5mL去除蛋白质、果胶色素、二元酚等杂质，滤液过D101树脂柱，充分吸附50min。再以15ml7:3二氯甲烷与乙醇混合溶液洗脱，收集洗脱液于蒸发皿。60℃恒温水浴挥干30min，洗涤蒸发皿，滤液至比色皿，定容至10ml，276nm处测吸光度值，根据标准曲线计算出红景天甙浓度，与高效液相所得结果红景天甙含量2.17%最为接近。
红景天拉丁文学名Rhodiola rosea，英文名Roseroot，是景天科多年生草木或灌木植物，其功效成分红景天甙，性味甘、苦、平。具有益气活血、通脉平喘、抗疲劳、提高体力等功能。目前,有关红景天甙的测定方法主要有薄层色谱-紫外和HPLC法，但实验操作复杂、耗时、设备昂贵。本实验采用分光光度法，能快速、简便检测红景天甙浓度，并与高效液相的结果进行比较，并对该方法进行评价。1 标准液的制备：精密称取烘干至恒重的红景天甙对照品15.0mg，置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，即得红景天甙标准溶液，浓度为0.3mg/mL。2 样品溶液的制备：水提红景天去除水不溶性杂质：称取该红景天提取物1.000g，加蒸馏水约100mL，加热至沸腾后煮30min，冷却后，静置12h，离心，弃去沉淀，搜集上清液。醇沉除去醇不溶性杂质：将上清液加热浓缩至30mL，连续搅拌加入无水乙醇120mL，调节料液醇度为75%，得到红景天醇液，常温静置2小时，过滤，弃去沉淀，搜集清液，回收乙醇。将回收乙醇后的滤液定容至100mL，得到样品溶液。3 绘制标曲：分别量取红景天甙标准溶液l，2，3，4，5，6，7，8 mL，置于25 mL容量瓶中，蒸馏水稀释至刻度，摇匀，以蒸馏水作空白，在276nm处测吸光度.以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标，绘制标准线.得红景天甙的线性回归方程为：A=5.1361 c+0.012，r=0.997，线性范围为0.012～0.096mg/mL。标准曲线如图1所示。4 样液处理方法：样液用1O%醋酸铅溶液2mL和饱和硫酸钠溶液0.5mL去除蛋白质、果胶色素、二元酚等杂质，滤液过D101树脂柱，充分吸附30min。再以15ml7:3二氯甲烷与乙醇混合溶液洗脱，收集洗脱液于蒸发皿。60℃恒温水浴挥干60min，洗涤蒸发皿，滤液至比色皿，定容至10ml，276nm处测吸光度值。5 优化过柱条件：5.1 吸附时间：在二氯甲烷：乙醇=7：3，洗脱剂用量为15mL时，考查吸附时间对精制结果的影响，吸附时间分别为20min、30min、40min、50min、60mim。5.2 吸附剂用量：在吸附时间30min，二氯甲烷：乙醇=7：3时，考查吸附剂用量对精制结果的影响，吸附剂用量为5、10、15、20、25mL。5.3 洗脱剂比例：在吸附时间30min，洗脱剂用量15mL时，考查吸附剂比例对精制结果的影响，吸附剂比例为二氯甲烷：乙醇=5:5、6:4、7：3、8: 2、9: 1。5.4 验证实验：由单因素实验得最优过柱条件：吸附时间50min，吸附剂用量15mL，吸附剂比例二氯甲烷：乙醇=7：3，进行验证实验，得红景天甙%为2.644、2.522、2.513，平均2.56%。与高效液相检测结果2.17 %相比，2.56%误差为18%。6 检测方法的评价6.1 精密度实验：五个平行样得红景天甙含量%为2.623、2.775、2.434、2.848、2.604，平均含量2.66%，标准偏差0.16%，小于0.2%，表明本法精密度高。6.2 稳定性实验：吸光度随时间变化不大，表明实验的稳定性好。6.3 加标回收实验：取1 ml供试样品溶液，分别加入0.1、0.2、0.3ml红景天标液，得回收率103.9%、105.5%、103.4%，平均104.3% ，相对标准偏差为1.10%，回收效果较好。7 小结：此方法以水提红景天甙，用分光光度法测定含量，并与高液结果进行比较。通过实验确定，样液用1O%醋酸铅溶液2mL和饱和硫酸钠溶液0.5mL去除蛋白质、果胶色素、二元酚等杂质，滤液过D101树脂柱，充分吸附50min。再以15ml7:3二氯甲烷与乙醇混合溶液洗脱，收集洗脱液于蒸发皿。60℃恒温水浴挥干30min，洗涤蒸发皿，滤液至比色皿，定容至10ml，276nm处测吸光度值，根据标准曲线计算出红景天甙浓度。与高效液相所得结果红景天甙含量2.17%相比，误差为+18%，加标回收率为104%。且此法准确、稳定、简便快捷、重现性好。, 百拇医药(朱冰清)