浅谈梅毒常用检测方法
(钦州市中心血站，广西 钦州，535000；钦州市妇幼保健院，广西 钦州，535000)
【关健词】 梅毒检测；梅毒螺旋体；检测方法
梅毒为苍白螺旋体(T.pallidum TP)感染引起的性传播疾病，亦是血液传播性疾病之一。梅毒发病率近年来在我国呈明显上升趋势，已成为十分重要的社会和医学问题[1]。据估计，全世界每年有200万新感染病例[2]。由于梅毒早期可以潜伏感染，晚期可引起全身组织和脏器的损害及病变，因此，选择快速、简便、敏感且特异的检测方法，对早期梅毒的诊断和治疗有重要意义。现对实验室常见梅毒的检测方法作一综述。1 目前常用的梅毒诊断方法1.1 病原学检查 直接检查TP是早期梅毒检测的最好方法。用药前取患者病灶渗出物或淋巴结穿刺液，在暗视野显微镜下观察TP的形态特征和运动方式。穿刺孕妇羊水做暗视野显微镜观察，对胎儿梅毒具有诊断价值。此外，作免疫荧光试验(DFA)，在荧光显微镜下可见绿色的TP。活体组织用银染色法或荧光抗体染色，可见黑褐色梅毒螺旋体。1.2 血清学检查 当人体感染TP2-4周后，血清中可产生一定数量的非特异性抗心磷脂类抗体和TP特异性抗体。用血清学方法可检测这两种抗体，作为梅毒诊断的重要手段。1.2.1 TP非特异性抗心磷脂抗体血清试验 TP感染人体后，宿主迅速对TP表面的脂质做出免疫应答，在3~4周后产生抗心磷脂抗体(反应素)。反应素对机体无保护作用。未经治疗，体内反应素可长期存在，经适当治疗后，逐渐减少至转为阴性。因此，可用于疗效观察及判愈。目前，检测反应素的实验常用：血浆反应素环状试验(RPR)、甲苯胺红不加热试验(TRSUT)、胶体金SYP等。它们的共同点：具有相同的抗原成分，敏感性相似且较差；易受生物学和某些生理因素的干扰导致假阳性；假阴性反应主要是前滞现象及敏感度较差所致；试验结果肉眼可观察，RPR和TRUST可用显微镜镜检以助结果的判定。1.2.2 TP特异性抗体血清试验 采用TP作抗原，检测梅毒IgG、IgM抗体。此检测法分为：⑴血球凝集试验(TPHA、TPPA等) ，利用间接血凝法测定人血清或血浆中的TP特异性抗体，血清吸收剂可消除试验中的生物学假阳性反应，提高试验的准确性。此试验用于梅毒确诊，具有快速、简便、敏感和特异等优点。⑵金标法是根据双抗原夹心免疫层析原理，样品中的TP抗体首选与金标抗原结合成复合物，顺膜渗透至包被区，与包被TP抗原结合，形成由胶体金抗原-TP抗体-抗原组成的紫红色反应带。本法简单，特异性好，无需特殊设备，全部试验过程可在30min内完成。⑶酶联免疫吸附试验(ELISA)是利用TP多肽抗原包被反应板的试验。它用双抗原夹心法，同时检测IgM/IgG抗体，可用于早期诊断，并避免了单片段抗原混合干扰。1.3 分子生物学法 目前主要用PCR试验，有引物和脱氧核糖核酸存在，在DNA聚合酶的作用下，利用模板DNA，针对编码TP抗原和TpN47(Tpp47)的DNA开放编码区扩增延伸。目前，有四套TP的PCR扩增系统。PCR是在兔感染试验(RIT)基础上建立起来的一种体外DNA扩增试验，该试验结果显示PCR检测方法敏感度和特异性均优于暗视野检测法和血清学试验，为梅毒的早期诊断起到重要作用。2 各种检验方法的比较2.1 病原学检查 标本为病灶渗出物或淋巴结穿刺液，观察TP的形态特征和运动方式。因此，该方法适合于感染早期用药前。镀银染色能使TP染成棕褐色或褐黑色，染色层次清楚，反差明显，形态清晰，易于辨认，封片后可永久保存，可用于科研或教学。对于早期显性梅毒的诊断及生殖器疱疹、软下疳的鉴别诊断具有重要意义。缺点：制约条件较多，如检前用药、荧光显微镜的性能、试剂和技术等均影响检测结果，而且，镀银染色不能观察TP的运动方式，易与类似物相混淆。因此，实际检出率并不高，很难从干疹、血液标本、口腔病灶中检出TP，对晚期及隐性梅毒病人也不适用。2.2.1 TP非特异性抗体血清试验 用于梅毒初筛试验。TP感染4周后有非特异性抗体出现。对于二期、三期梅毒以及判定梅毒的发展和痊愈，药物的疗效有重要意义，且实验操作简易、快速、易于观察结果，成本低等，适合批量筛查。但敏感性、特异性较差，易受其他因素影响，有时会出现假阳性和假阴性，容易造成漏检和误诊。不适合早期梅毒、先天梅毒、神经梅毒的诊断。孕妇梅毒筛查可考虑用RPR试验，因为孕妇梅毒隐性感染者占98%，RPR对隐性梅毒敏感。2.3 分子生物学法 常用PCR法，标本为病灶分泌物或穿刺液。对生殖器溃疡能早期鉴别诊断，区分梅毒、生殖器疱疹及软下疳。优点：对一期梅毒、艾滋病合并梅毒、神经梅毒等均较敏感，可区分母体梅毒与胎传梅毒，能判断传染性。这点优于血清学。由于 TP现在还不能人工培养，因此，PCR法又优越于病原学方法。缺点：干扰因素较多，如引物的非特异性，易受标本中的组织和细胞碎片等物质抑制。而且当皮损开始愈合、分泌物减少、血清学试验阳性反应时，采用PCR方法就不合适。3 展望
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梅毒检测方法过去一度仅依赖于病原学方法，利用暗视野显微镜观察螺旋体和血清学方法检测血清或血浆中抗体，由于敏感性、特异性较低，干扰因素较多，假阴假阳时有发生，误诊漏检不少。随着分子生物学技术发展，PCR和免疫印迹技术为梅毒的诊断提供了新的检测手段。特别是在早期梅毒、先天性梅毒及神经梅毒检测中显示了较高的敏感性和较强的特异性。对梅毒早期诊断与治疗，预防与控制有重要意义。但目前，确诊试剂仍依赖进口，各仪器使用专一试剂，各经销商相互垄断，造成价格昂贵。如试剂国产化，仪器使用开放式的试剂，降低试剂成本，有利于梅毒筛查方法的选择，对梅毒的诊断、治疗，预防与控制，最终彻底消灭梅毒意义重大。参考文献[1]吴志华.皮肤性病学[M],第3版.广州：广东科学技术出版社，2001:132[2]曹仁烈.性病基本知识讲座[J]临床医学杂志,1988,4(1)7, 百拇医药(黄枝艳 杨善业)
【关健词】 梅毒检测；梅毒螺旋体；检测方法
梅毒为苍白螺旋体(T.pallidum TP)感染引起的性传播疾病，亦是血液传播性疾病之一。梅毒发病率近年来在我国呈明显上升趋势，已成为十分重要的社会和医学问题[1]。据估计，全世界每年有200万新感染病例[2]。由于梅毒早期可以潜伏感染，晚期可引起全身组织和脏器的损害及病变，因此，选择快速、简便、敏感且特异的检测方法，对早期梅毒的诊断和治疗有重要意义。现对实验室常见梅毒的检测方法作一综述。1 目前常用的梅毒诊断方法1.1 病原学检查 直接检查TP是早期梅毒检测的最好方法。用药前取患者病灶渗出物或淋巴结穿刺液，在暗视野显微镜下观察TP的形态特征和运动方式。穿刺孕妇羊水做暗视野显微镜观察，对胎儿梅毒具有诊断价值。此外，作免疫荧光试验(DFA)，在荧光显微镜下可见绿色的TP。活体组织用银染色法或荧光抗体染色，可见黑褐色梅毒螺旋体。1.2 血清学检查 当人体感染TP2-4周后，血清中可产生一定数量的非特异性抗心磷脂类抗体和TP特异性抗体。用血清学方法可检测这两种抗体，作为梅毒诊断的重要手段。1.2.1 TP非特异性抗心磷脂抗体血清试验 TP感染人体后，宿主迅速对TP表面的脂质做出免疫应答，在3~4周后产生抗心磷脂抗体(反应素)。反应素对机体无保护作用。未经治疗，体内反应素可长期存在，经适当治疗后，逐渐减少至转为阴性。因此，可用于疗效观察及判愈。目前，检测反应素的实验常用：血浆反应素环状试验(RPR)、甲苯胺红不加热试验(TRSUT)、胶体金SYP等。它们的共同点：具有相同的抗原成分，敏感性相似且较差；易受生物学和某些生理因素的干扰导致假阳性；假阴性反应主要是前滞现象及敏感度较差所致；试验结果肉眼可观察，RPR和TRUST可用显微镜镜检以助结果的判定。1.2.2 TP特异性抗体血清试验 采用TP作抗原，检测梅毒IgG、IgM抗体。此检测法分为：⑴血球凝集试验(TPHA、TPPA等) ，利用间接血凝法测定人血清或血浆中的TP特异性抗体，血清吸收剂可消除试验中的生物学假阳性反应，提高试验的准确性。此试验用于梅毒确诊，具有快速、简便、敏感和特异等优点。⑵金标法是根据双抗原夹心免疫层析原理，样品中的TP抗体首选与金标抗原结合成复合物，顺膜渗透至包被区，与包被TP抗原结合，形成由胶体金抗原-TP抗体-抗原组成的紫红色反应带。本法简单，特异性好，无需特殊设备，全部试验过程可在30min内完成。⑶酶联免疫吸附试验(ELISA)是利用TP多肽抗原包被反应板的试验。它用双抗原夹心法，同时检测IgM/IgG抗体，可用于早期诊断，并避免了单片段抗原混合干扰。1.3 分子生物学法 目前主要用PCR试验，有引物和脱氧核糖核酸存在，在DNA聚合酶的作用下，利用模板DNA，针对编码TP抗原和TpN47(Tpp47)的DNA开放编码区扩增延伸。目前，有四套TP的PCR扩增系统。PCR是在兔感染试验(RIT)基础上建立起来的一种体外DNA扩增试验，该试验结果显示PCR检测方法敏感度和特异性均优于暗视野检测法和血清学试验，为梅毒的早期诊断起到重要作用。2 各种检验方法的比较2.1 病原学检查 标本为病灶渗出物或淋巴结穿刺液，观察TP的形态特征和运动方式。因此，该方法适合于感染早期用药前。镀银染色能使TP染成棕褐色或褐黑色，染色层次清楚，反差明显，形态清晰，易于辨认，封片后可永久保存，可用于科研或教学。对于早期显性梅毒的诊断及生殖器疱疹、软下疳的鉴别诊断具有重要意义。缺点：制约条件较多，如检前用药、荧光显微镜的性能、试剂和技术等均影响检测结果，而且，镀银染色不能观察TP的运动方式，易与类似物相混淆。因此，实际检出率并不高，很难从干疹、血液标本、口腔病灶中检出TP，对晚期及隐性梅毒病人也不适用。2.2.1 TP非特异性抗体血清试验 用于梅毒初筛试验。TP感染4周后有非特异性抗体出现。对于二期、三期梅毒以及判定梅毒的发展和痊愈，药物的疗效有重要意义，且实验操作简易、快速、易于观察结果，成本低等，适合批量筛查。但敏感性、特异性较差，易受其他因素影响，有时会出现假阳性和假阴性，容易造成漏检和误诊。不适合早期梅毒、先天梅毒、神经梅毒的诊断。孕妇梅毒筛查可考虑用RPR试验，因为孕妇梅毒隐性感染者占98%，RPR对隐性梅毒敏感。2.3 分子生物学法 常用PCR法，标本为病灶分泌物或穿刺液。对生殖器溃疡能早期鉴别诊断，区分梅毒、生殖器疱疹及软下疳。优点：对一期梅毒、艾滋病合并梅毒、神经梅毒等均较敏感，可区分母体梅毒与胎传梅毒，能判断传染性。这点优于血清学。由于 TP现在还不能人工培养，因此，PCR法又优越于病原学方法。缺点：干扰因素较多，如引物的非特异性，易受标本中的组织和细胞碎片等物质抑制。而且当皮损开始愈合、分泌物减少、血清学试验阳性反应时，采用PCR方法就不合适。3 展望
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梅毒检测方法过去一度仅依赖于病原学方法，利用暗视野显微镜观察螺旋体和血清学方法检测血清或血浆中抗体，由于敏感性、特异性较低，干扰因素较多，假阴假阳时有发生，误诊漏检不少。随着分子生物学技术发展，PCR和免疫印迹技术为梅毒的诊断提供了新的检测手段。特别是在早期梅毒、先天性梅毒及神经梅毒检测中显示了较高的敏感性和较强的特异性。对梅毒早期诊断与治疗，预防与控制有重要意义。但目前，确诊试剂仍依赖进口，各仪器使用专一试剂，各经销商相互垄断，造成价格昂贵。如试剂国产化，仪器使用开放式的试剂，降低试剂成本，有利于梅毒筛查方法的选择，对梅毒的诊断、治疗，预防与控制，最终彻底消灭梅毒意义重大。参考文献[1]吴志华.皮肤性病学[M],第3版.广州：广东科学技术出版社，2001:132[2]曹仁烈.性病基本知识讲座[J]临床医学杂志,1988,4(1)7, 百拇医药(黄枝艳 杨善业)