防风合剂中黄芩苷的含量测定
【摘要】目的：建立高效液相法测定防风合剂中黄芩苷的含量测定。方法：采用Waters600高效液相色谱仪，选用C18为固定相，流动相为甲醇-水-磷酸(43：57：0.2)，流速：1.0ml/min，检测波长为278nm。结果：黄芩苷在进样量0.200~10.000μg范围内线形关系良好，r=0.999442；黄芩苷的平均回收率为98.5%，RSD为2.1%，(n=5)。结论：本方法简便，准确，重现性良好，可用于该制剂的质量控制。
【关键词】防风合剂；高效液相色谱法；黄芩苷
防风合剂是湖北省中医院研制的复方制剂，由黄芩，防风，槐花，钩藤等12味中药组成，具有清热，止痉，熄风的功效，用于预防破伤风等。为了控制该合剂的质量，保证临床用药的安全有效，我们对防风合剂的质量进行了研究，考虑到黄芩是该药中的君药之一，其主要成分是黄芩苷[1]，为了有效控制内在质量，本文采用高效液相色谱法对其中主药黄芩的有效成分黄芩苷进行了含量测定。
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1仪器与试药
1.1仪器Waters600高效液相色谱仪；Wasters 2996检测仪；RE-52A旋转蒸发器；AS-10200型超声波发生器
1.2样品与试剂防风合剂(湖北省中医院制剂室，批号030305，030328，030410，030416，030422)；黄芩苷对照品(购于中国药品生物制品检定所)；甲醇(色谱纯)；磷酸(色谱纯)；无水乙醇(分析纯)。
1.3色谱条件[2~3]色谱柱：ODS C18(5μm,3.9×150nm)；流动相：甲醇-水-磷酸(43：57：0.2)；流速1ml/min，检测波长：278nm；柱温25℃，进样量20μl。
2方法与结果
2.1对照品溶液的配制精密称取黄芩苷对照品12.5mg，置于25ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，得对照品溶液，精密吸取该溶液0.2，0.8，3.0，5.0，10.0ml于10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
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2.2标准曲线的制备各取对照液20μl进样，记录色谱图，由仪器数据处理系统给出标准曲线，表明黄芩苷在进样0.200~10.000μg范围内线性关系良好，回归方程为：Y=68000000X-466000，r=0.999442。
2.3供试品溶液的配制精密吸取1ml防风合剂，于旋转蒸发器中70℃蒸干，加甲醇溶液溶解并定容于10ml容量瓶中，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液备用。
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，结果见图2。
图2黄芩苷对照品和防风合剂高效液相色谱图
A.对照品； B. 样品；
2.4空白溶液的配制除黄芩药材外，按照处方比例，称取药材，按照防风合剂制备工艺制备，取100ml，加300ml无水乙醇，使含醇量达到75%，冰箱放置24h后取出，抽滤。澄清液于旋转蒸发器中低温蒸干乙醇，残渣用甲醇溶解，定容于100ml容量瓶中，精密吸取1ml溶液于10ml量瓶中，用甲醇定容，再精密吸取1ml于另一10ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得。
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2.5空白干扰试验按照上述色谱条件，吸取对照品溶液，供试品溶液空白溶液20μl测定，在供试品色谱图中，与对照品色谱峰相应的位置上有一相同保留时间的色谱峰，而空白溶液在此保留时间无峰干扰。
2.6精密度试验：取线性试验项下黄芩苷对照品溶液(0.04mg/ml)连续进样5次，每次20μl，根据峰面积分值计算，RSD=1.05%
2.7稳定性试验取同一样品溶液分别制备后，0，1，2，4，8，12，24h测定一次峰面积，结果RSD=1.5%。样品溶液至少在24小时内稳定性良好。
2.8加样回收率试验取已知含量的样品1ml，5份，加入对照品溶液1，2，3，4，5ml，按照样品测定法测定，平均回收率为98.5%，RSD=2.1%。
2.9重复性试验取同一批样品5份，依法测定含量，平均含量为19.2mg/ml，RSD为1.8%。
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2.10样品测定按照含量测定方法共测定了4批样品，含量分别为1.90mg/ml，1.89mg/ml，1.92mg/ml，1.91 mg/ml。
3讨论
黄芩为防风合剂的均药，黄芩苷为黄芩的主要成分，故可以黄芩苷作为本药的质量控制的定量指标，根据4批样品含量测定数据，初步制定防风合剂中黄芩苷含量以不少于1.85 mg/ml 为标准，来控制其质量。
HPLC测定防风合剂中黄芩苷含量的方法学考察结果表明，在278nm检测波长下，以甲醇-水-磷酸(43：57：0.2)为流动相，C18为固定相，该方法在进样量为0.200~10.000μg范围内线性关系良好， r=0.999442，重复性和稳定性良好，加样回收试验回收率达98.5%，RSD值为2.1%。此种方法简便，准确，重复性好，空白无干扰，可作为防风合剂中黄芩苷含量测定的定量方法，为医院指制定防风合剂的质量标准提供了快速准确的测定方法。
参考文献
[1]文敏，李雪，付守廷.黄芩苷药理作用研究新进展[J].沈阳药科大学学报，2008，25(2)：158-159.
[2]赵世初，王连心，洪志强等.黄芩苷提取和测定方法的研究[J].中医药学刊，2006，24(3)：57
[3]罗千古，陶莉. HPLC测定芩黄颗粒中黄芩苷的含量[J].中国现代中药，2011,13(8):34-35, http://www.100md.com(郑佳)
【关键词】防风合剂；高效液相色谱法；黄芩苷
防风合剂是湖北省中医院研制的复方制剂，由黄芩，防风，槐花，钩藤等12味中药组成，具有清热，止痉，熄风的功效，用于预防破伤风等。为了控制该合剂的质量，保证临床用药的安全有效，我们对防风合剂的质量进行了研究，考虑到黄芩是该药中的君药之一，其主要成分是黄芩苷[1]，为了有效控制内在质量，本文采用高效液相色谱法对其中主药黄芩的有效成分黄芩苷进行了含量测定。
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1仪器与试药
1.1仪器Waters600高效液相色谱仪；Wasters 2996检测仪；RE-52A旋转蒸发器；AS-10200型超声波发生器
1.2样品与试剂防风合剂(湖北省中医院制剂室，批号030305，030328，030410，030416，030422)；黄芩苷对照品(购于中国药品生物制品检定所)；甲醇(色谱纯)；磷酸(色谱纯)；无水乙醇(分析纯)。
1.3色谱条件[2~3]色谱柱：ODS C18(5μm,3.9×150nm)；流动相：甲醇-水-磷酸(43：57：0.2)；流速1ml/min，检测波长：278nm；柱温25℃，进样量20μl。
2方法与结果
2.1对照品溶液的配制精密称取黄芩苷对照品12.5mg，置于25ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，得对照品溶液，精密吸取该溶液0.2，0.8，3.0，5.0，10.0ml于10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
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2.2标准曲线的制备各取对照液20μl进样，记录色谱图，由仪器数据处理系统给出标准曲线，表明黄芩苷在进样0.200~10.000μg范围内线性关系良好，回归方程为：Y=68000000X-466000，r=0.999442。
2.3供试品溶液的配制精密吸取1ml防风合剂，于旋转蒸发器中70℃蒸干，加甲醇溶液溶解并定容于10ml容量瓶中，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液备用。
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，结果见图2。
图2黄芩苷对照品和防风合剂高效液相色谱图
A.对照品； B. 样品；
2.4空白溶液的配制除黄芩药材外，按照处方比例，称取药材，按照防风合剂制备工艺制备，取100ml，加300ml无水乙醇，使含醇量达到75%，冰箱放置24h后取出，抽滤。澄清液于旋转蒸发器中低温蒸干乙醇，残渣用甲醇溶解，定容于100ml容量瓶中，精密吸取1ml溶液于10ml量瓶中，用甲醇定容，再精密吸取1ml于另一10ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得。
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2.5空白干扰试验按照上述色谱条件，吸取对照品溶液，供试品溶液空白溶液20μl测定，在供试品色谱图中，与对照品色谱峰相应的位置上有一相同保留时间的色谱峰，而空白溶液在此保留时间无峰干扰。
2.6精密度试验：取线性试验项下黄芩苷对照品溶液(0.04mg/ml)连续进样5次，每次20μl，根据峰面积分值计算，RSD=1.05%
2.7稳定性试验取同一样品溶液分别制备后，0，1，2，4，8，12，24h测定一次峰面积，结果RSD=1.5%。样品溶液至少在24小时内稳定性良好。
2.8加样回收率试验取已知含量的样品1ml，5份，加入对照品溶液1，2，3，4，5ml，按照样品测定法测定，平均回收率为98.5%，RSD=2.1%。
2.9重复性试验取同一批样品5份，依法测定含量，平均含量为19.2mg/ml，RSD为1.8%。
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2.10样品测定按照含量测定方法共测定了4批样品，含量分别为1.90mg/ml，1.89mg/ml，1.92mg/ml，1.91 mg/ml。
3讨论
黄芩为防风合剂的均药，黄芩苷为黄芩的主要成分，故可以黄芩苷作为本药的质量控制的定量指标，根据4批样品含量测定数据，初步制定防风合剂中黄芩苷含量以不少于1.85 mg/ml 为标准，来控制其质量。
HPLC测定防风合剂中黄芩苷含量的方法学考察结果表明，在278nm检测波长下，以甲醇-水-磷酸(43：57：0.2)为流动相，C18为固定相，该方法在进样量为0.200~10.000μg范围内线性关系良好， r=0.999442，重复性和稳定性良好，加样回收试验回收率达98.5%，RSD值为2.1%。此种方法简便，准确，重复性好，空白无干扰，可作为防风合剂中黄芩苷含量测定的定量方法，为医院指制定防风合剂的质量标准提供了快速准确的测定方法。
参考文献
[1]文敏，李雪，付守廷.黄芩苷药理作用研究新进展[J].沈阳药科大学学报，2008，25(2)：158-159.
[2]赵世初，王连心，洪志强等.黄芩苷提取和测定方法的研究[J].中医药学刊，2006，24(3)：57
[3]罗千古，陶莉. HPLC测定芩黄颗粒中黄芩苷的含量[J].中国现代中药，2011,13(8):34-35, http://www.100md.com(郑佳)