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编号:13185655
阴道局部甘露糖结合凝集素浓度及其基因多态性与细菌性阴道病的相关性研究(2)
http://www.100md.com 2011年12月1日 黄小敏  陈永连  柳晓春 &#
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    参见附件。

     1.2.3 MBL基因多态性分析 采用盐析法提取阴道上皮细胞DNA, 采用PCR法扩增 MBL外显子ⅠDNA,采用多聚酶连反应限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)检测。引物序列参照Sumiya等[4]所用序列,扩增片段长度为328 bp。①PCR扩增所需物质及参数: dNTP (各10 mmol /L) 0.25μL,10 ×PCR 缓冲液 (MgCl2 浓度15 mmol/L ) 25μL, Taq酶( 5 U/μL) 0.25μL, 模板DNA 2μL,上下游引物 (各10 pmol/μL) 0.5μL,双蒸水补至25μL。扩增条件: 94℃下预变性4 min;循环条件: 94℃变性60 s, 57℃退火30 s, 72℃延伸30 s,连续35个循环; 72℃延伸5 min;②限制性内切酶:Ban Ⅰ(20 000 U/mL) 0.5μL。反应条件: 37℃下孵育60 min; ③酶切产物分析: 采用3%琼脂糖胶凝电泳。④结果判断:正常MBL基因外显子Ⅰ的第 54位密码子存在GGC/GAC的变异, 表现为野生纯合子GGC/GGC, 杂合子 GGC/GAC 和变异型纯合子GAC/GAC。MBL基因 的PCR产物大小为 328 bp , 野生纯合子可被 Ban Ⅰ识别,并完全切割为 246 bp和 82 bp的2条片段;突变杂合子型经酶切后得到328 bp、 246 bp 和82 bp 3条片段,而变异型纯合子限制性内切酶切位点消失,不能被切开,仍为 1条 328 bp的条带。

    1.3  统计学处理

    实验数据采用 SPSS11.5软件,计量资料用()表示。BV组和对照组年龄及月经周期分布情况的比较采用x2检验,BV和 RBV组与对照组MBL浓度的比较采用t检验,BV和 RBV组与对照组 MBL基因突变频率的比较采用x2检验, P<0.05为差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1 3组年龄分布和月经周期情况比较(表1)

    2.2 3组MBL浓度比较

    BV组MBL浓度为(8.95±1.47)ng/mL,明显高于对照组(4.79±1.98) ng/mL ......

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