晚期糖基化终末产物及受体在实验性2型糖尿病大鼠种植体周围的变化及表达(2)
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1.1.2 动物 3月龄SD健康雄性大鼠45只，体重160～220 g(购于江苏省疾病研究所)。
1.1.3 实验仪器 ACCU-CHEK血糖仪(德国罗氏公司)；岛津荧光分光光度计(RF-5301PC型)；抗RAGE单克隆抗体(上海研生生化试剂有限公司)；JJQ-P2016A生物组织切片机(武汉俊杰生物科技公司)；奥林巴斯UIS2显微镜。
1.2 方法
1.2.1 2型DM大鼠模型的建立 所有的实验大鼠均适应性喂养2周，禁食12 h，随机分为DM模型组25只(防止中途死亡和建模失败)和正常对照组20只，先喂以高脂高果糖饲料4周，饮水为自来水，4周后小剂量链脲佐菌素(STZ，30 mg/kg)腹腔注射1次，2周后诱导建立2型糖尿病模型，尾静脉采血检测血糖值，血糖高于11.1 mmol/L视为建模成功[3]，不符合者剔除。正常组则注射等量枸橼酸钠溶液。DM模型组中22只血糖达到预期标准，剩余3只未达到上述标准被淘汰。在饲养过程中因血糖过高，模型组大鼠死亡2只。将剩余20只建模成功的大鼠随机分为DM组和DM种植组，每组10只。将20只正常组大鼠随机分为正常对照组和正常种植组，每组10只。
1.2.2 植入种植体 手术区按常规手术备皮消毒，腹腔注射4%戊巴比妥钠(1.5 mL/kg)麻醉种植组大鼠，麻醉后于术区切开、剥离、露出骨面后定位，在生理盐水冷却下制备种植体窝，植入种植体，检验初期稳定性，创口对位缝合，术后给予青霉素粉剂预防感染。待实验大鼠苏醒后继续给予常规喂养，并检测DM组大鼠血糖，必要时按注射计量再注射1次，使其维持在实验模型范围内。
1.2.3 采集样品 10周后测量血糖，再次称体重，然后在禁食12 h后下腔静脉采血后处死大鼠。种植组大鼠，于术区取下种植体，切取种植体及周围骨组织；非种植组大鼠，切取左侧胫骨近骺端约1 cm范围内骨组织，剔除包括骨膜在内的所有软组织，所取标本于10%中性缓冲福尔马林液固定，EDTA脱钙，乙醇中按顺序逐级脱水，种植组平行于种植体连续石蜡切片，取种植体周围4 mm的骨组织进行4μm切片行HE染色 ......
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