单个核细胞源性血管内皮生长因子在急性心肌梗死患者中的动态变化及意义(2)
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1.2 急性心肌梗死的诊断
根据WHO标准持续典型的胸痛30 min以上；典型心电图动态变化；心肌酶(肌酸磷酸激酶及其同工酶MB或肌钙蛋白)动态变化。具有以上中任何2项即可确诊。
1.3 正常对照者入选条件
对照组与AMI组进行性别、年龄配对，经病史询问无心血管疾病史，体格检查无阳性体征，胸片、心电图、肝肾功能、生化常规检查无异常者。合并严重心衰、肝、肾功能衰竭、感染性疾病、肿瘤、外周血管病、脑卒中者予以剔除。
所有患者在发病2 d内进行床旁心脏彩色多普勒超声检测左室射血分数(left ventricular ejection fraction，LVEF)，半月后(出院时)复查LVEF(由心脏彩超室专人质控检测)。
1.4 主要仪器和试剂
CO2培养箱：美国Formal Scientific公司；Lympus倒置显微镜：日本；酶联免疫检测仪：美国EL312eVEGF酶联免疫检测试剂盒：北京晶美生物工程有限公司(进口分装)，检测灵敏度为30 pg/mL，批内、批间误差均<9.5%；淋巴细胞分离液：Ficoll-Hypaque液，中科院血液研究所；PBS液：新鲜配制；RPMI-1640：GIBCO，美国；小牛血清：笔者所在医院中心实验室制备；双抗：青霉素100 IU/mL，链霉素100μg/mL。
1.5 研究方法
1.5.1 外周血单个核细胞(PBMCs)的分离和培养及标本的提取
1.5.1.1 PBMCs的分离 (1)在AMI患者发病的第1、5、10、15天分别抽取20 mL静脉血放入肝素抗凝离心管内，摇匀，用PBS液稀释血液1倍，对照组仅抽1次静脉血。(2)取淋巴分离液4 mL，放入15 mL离心管中。(3)将稀释全血沿试管壁徐徐加入，使稀释血液重叠于淋巴分离液上，稀释血液与分离液体积之比约为2∶1。(4)用水平离心机以2 000 rpm离心20 min，离心后，单个核细胞位于血浆和淋巴分离液界面层。(5)吸取界面单个核细胞层，用PBS洗涤3次，每次1 500 rpm离心10 min ......
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