苦参素对溃疡性结肠黏膜细胞NF-κB表达的影响(2)
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参见附件。
1.3 结果分析
反应结束后，使用Sequence detection soft wareversion1.2.3软件(Applied Biosystems公司)分析PCR过程各检测样本的CT(threshold cycle)值。CT值的含义是每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。每个模板的CT值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，CT值越小。本研究通过2-△△CT计算SOD相对mRNA表达水平：△CTintervention=CTinterventionNF-κB-CTintervention β-actin；△CTblank=CTblank NF-κB-CT blankβ-actin；△△CT=△CTintervention-△CT blank；NF-κB mRNA表达差别倍数以2-△△CT表示。由熔解曲线判断PCR反应的特异性。
2 结果
2.1 RT-PCR溶解曲线分析
各实验组NF-κB和ACTION熔解曲线中均有单一的主峰，熔解温度为85℃，相同扩增条件下重复多次，得到的NF-κB和ACTION熔解温度均在85℃左右，上下不超过1 ℃，说明所扩增的为特异性产物。见图1、2。
图1 结肠黏膜细胞中NF-κB荧光定量PCR溶解曲线
图2 结肠黏膜细胞中β-action荧光定量PCR溶解曲线
2.2 2-△△CT法可行性分析
要使2-△△CT法计算方法有效，目的基因与管家基因的扩增效率必须相等 ......
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