双氢青蒿素对卵巢癌细胞株HO-8910生长及Ang-2表达的影响(2)
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1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 接种细胞 人卵巢癌细胞株HO-8910，购自中国医学科学院基础医学研究所细胞中心。
1.1.2 主要试剂 双氢青蒿素(DHA，重庆华立武陵山制药厂)；顺铂注射液(齐鲁制药有限公司)；Ang-2兔抗人多克隆抗体、DAB试剂盒、SP免疫组化试剂盒均购自武汉博士德生物有限公司。
1.1.3 实验动物 雌性清洁级BALB/c裸小鼠，25只，4～6周龄，体量18～20 g，由国家噬齿类种子中心-中国药品生物制品检验所实验动物中心提供[SCXK(京)2009-0017]，饲养于山西医科大学实验动物中心SPF级动物房。
1.2 方法
1.2.1 荷瘤小鼠模型的建立 常规培养人卵巢癌细胞株HO-8910，接种于含10%小牛血清的RMPI-1640培养基，置于37 ℃ 5% CO2孵箱中培养，将对数生长期细胞用无血清的RMPI-1640配成浓度为3.0×107/mL的单细胞悬液，接种BALB/c-裸鼠，每只裸鼠腋窝皮下接种0.2 mL。
1.2.2 实验分组 接种20 d后随机(随机数目表法)分为5组(每组5只)：(1)空白对照组(生理盐水)：灌胃给予生理盐水0.2 mL/d，共10 d；(2)阳性对照组(顺铂组)：按每日2 mg/kg腹腔注射给药，共5 d，之后给生理盐水0.2 mL/d，5 d；(3)DHA高剂量组：按每日200 mg/kg灌胃给药，共10 d；(4)DHA低剂量组：按每日100 mg/kg灌胃给药，共10 d；(5)联合处理组：灌胃给予DHA(200 mg/kg)5 d后，腹腔注射顺铂(2 mg/kg)5 d，共10 d。
1.2.3 指标检测 各裸鼠接种细胞前分别称重。接种细胞后每天观察小鼠的一般情况。所有小鼠均隔3天1次测其体重，并绘制体质量曲线图。末次给药后24 h时处死动物，剥离瘤体并称重，计算各组小鼠平均瘤重(W)及抑瘤率(IR) ......
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