东垣益气膏预防性给药对肺气虚证大鼠基质金属蛋白酶表达的影响(2)
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参见附件。
1.3?主要仪器设备
显微镜(日本奥林巴斯，BX51T-PHD-J11)，多功能真彩色细胞图象分析管理系统(美国Media Cybernetics 公司，Image-Pro Plus)，切片机(德国莱卡，RM2015)，离心机(北京离心机厂，LDZ5-2型)。
1.4?实验方法
1.4.1?模型制作?大鼠适应性喂养l周后，除对照组外，模型组采用文献[1] 的方法，将大鼠分批置入特制的1 m3的烟室中， 用锯末50 g加10支红山茶牌香烟混合点燃烟熏，熏烟 30 min/次， 2次/d；自由进食、饮水，适当通风，以防大鼠窒息。每天观察并记录其症状体征变化，60 d完成造模。
1.4.2?分组与给药?将大鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半。(1)对照组：置于正常无烟环境中饲养，不予处理。(2)模型组：造模开始时以20 mL/(kg·d)灌服无菌水1次/d。(3)阳性对照组：造模开始时予玉屏风颗粒水溶剂5 g/(kg·d)。(4)东垣益气膏低剂量组：造模开始时予东垣益气膏水溶剂灌胃 5 g/(kg·d)，相当于成人常规临床用量7倍。(5)东垣益气膏高剂量组：造模开始时予东垣益气膏水溶剂灌胃 10 g/(kg·d)，相当于成人常规临床用量的14倍。
1.5?取材及观察指标
1.5.1?症状与体征?观察各组大鼠的活动度、对外界反应的灵敏度、摄食、体重、毛发色泽的变化。
1.5.2?MMP-2和MMP-9表达的检测?取每只大鼠的右肺下叶及气管，按照免疫组织化学染色SABC方法，用磷酸盐缓冲液冲洗、4%多聚甲醛进行脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋，将厚度5 μm的组织切片附于经多聚赖氨酸附膜的载玻片上，60℃过夜，脱蜡、入水。用正常山羊血清替代一抗作阴性对照。MMP-2和MMP-9的阳性表达以光学显微镜下见细胞质中出现明确的棕黄色颗粒的细胞为标准。结果采用多功能真彩色细胞图象分析管理系(美国Media Cybernetics公司)对MMP-2和 MMP-9的表达进行图像分析，表达结果用阳性面积和平均光密度表示。
1.6?统计学处理
采用 SPSS11.0软件进行统计分析，数据用()表示， 各组间比较用t 检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2?结果
2 ......
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