超声波法与酶解法联合制备短刺小克银汉霉原生质体及其活性评价(1)
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[摘要]目的 采用超声波细胞仪破碎法与酶解法联合制备短刺小克银汉霉原生质体，提高原生质体的制备量。 方法 采用蜗牛酶将短刺小克银汉霉细胞壁消化，采用超声波细胞破碎仪机械破碎加速其原生质体的释放，得到符合实验要求的原生质体。 结果 通过正交实验优化得到制备短刺小克银汉霉原生质体的条件是：以0.6 mol/mL氯化钾作为渗透压稳定剂，以10 mg/mL蜗牛酶为酶解剂，选用菌龄为12 h的菌丝，在37℃下酶解2 h，最后使用超声波细胞破碎仪破碎菌丝体15 min。短刺小克银汉霉活性原生质体的释放量是7.5×10 7个/mL，且其7 d内的存活率维持在90%以上。 结论 超声波细胞仪破碎法和酶解法联合使用可有效提高短刺小克银汉霉原生质体的释放率和活性。
[关键词]短刺小克银汉霉；原生质体；超声波细胞仪破碎法；酶解法
[中图分类号] TQ920.1 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616(2013)03-
小克银汉霉(Cunninghamella)是一种丝状真菌，其属于接合菌门毛霉菌目，现已发现共有14个种，最主要特点在于其具有与人体肝脏类似的药物主要代谢酶—细胞色素P450酶(Cytochrome P450)，可以对药物进行体外转化产生与哺乳动物相似的或者不同的代谢产物，现已证明其可以代谢的药物有91种之多[1]，因此，小克银汉霉可以作为药物研究中的模式代谢菌，用于体外生物转化药物直接产生活性产物，广泛应用于药理学、毒理学、工业生产等研究领域。但对毒性和难溶性药物的转化，却存在着转化率较低，转化时间长，产物单一等系列问题，分析其中主要原因在于，它本身存在的细胞壁阻碍了药物与酶的结合，大大降低了转化速率[2]。因此，采用一定工艺酶促降解其细胞壁，利用其原生质体直接转化药物是一种比较理想的方法。现已有报道采用研磨法、普通超声波法、酶解法制备原生质体 ......
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