非小细胞肺癌血清MGMT、RASSF2、RUNX3及RASSF1A基因启动子CpG岛甲基化的联合检测及意义(2)
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参见附件。
1.3.1.2 MGMT的引物设计及PCR反应体系 参照文献[4]设计MGMT引物，分别识别甲基化特异性(M)和非甲基化特异性序列(U)。MGMT具体序列为：M正义引物：5'-TTTCGACGTTCGTAGGTTTTCGC-3'，M反义引物：5'-GCACTCTTCCGAAA-ACGAAACG-3'；扩增产物大小81 bp。U正义引物：5'-TTTGTGTTTTGATGTTTGTAGGTTTTTGT-3'，U反义引物：5'-AACTCCACACTCTTCCAAAAACAAAACA-3'；扩增产物大小93 bp。
PCR反应体系20 μL，其中去离子水14.95 μL，10×PCR缓冲液 2 μL，MgCl2(25 mmol/L)1.2 μL，dNTPs (10 mmol/L)0.25 μL，上下游引物各0.2 μL (25 pmol)，修饰后的DNA模板1 μL，Taq DNA聚合酶(10 U/μL)0.2 μL，充分混匀后置DNA扩增仪中扩增。反应条件为：95℃预变性5 min，95℃变性30 sec、66℃退火35 sec、72℃延伸40 sec，共35个循环，最后72℃延伸10 min。
1.3.2 RASSF2的PCR扩增
1.3.2.1 RASSF2的CpG岛信息 RASSF2基因的CpG岛位于染色体(chr20：47537-4752146) ......
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