非小细胞肺癌血清MGMT、RASSF2、RUNX3及RASSF1A基因启动子CpG岛甲基化的联合检测及意义(3)

http://www.100md.com 2013年3月15日 赵培革?鲁德玕?姬晓青?赵琦?刘忠志?孙立红

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    参见附件。

     1.4.2 RUNX3的引物设计及PCR反应体系 参照文献[6]设计RUNX3引物，分别识别甲基化特异性(M)和非甲基化特异性序列(U)。RUNX3引物具体序列为：M正义引物：5'-GCGGTAAGATGGGCGAGAATA-3'，M反义引物：5'-CACGAACTCGCCTACGTAATC-3'；扩增产物大小234 bp。U正义引物：5'- TGGTAAGATGGGTGAGAATA3'，U反义引物：5'-CACAAACTCACCTACATAATCC-3'；扩增产物大小234 bp。

    PCR反应体系20 μL，其中去离子水14.95 μL，10×PCR缓冲液 2 μL，MgCl2(25 mmol/L)1.2 μL，dNTPs (10 mmol/L)0.25 μL，上下游引物各0.2 μL(25 pmol)，修饰后的DNA模板1 μL，Taq DNA聚合酶(10 U/μL)0.2 μL，充分混匀后置DNA扩增仪中扩增。反应条件为：95℃预变性5 min，95℃变性30 sec，M引物60℃退火40 sec，U引物56℃退火30 sec，72℃延伸30 sec，共55个循环，最后72℃延伸5 min[7]。

    1.5 统计学方法

    统计学分析在SPSS13.0版软件包上完成，定量资料采用t检验，分类资料采用x2检验或Fisher精确概率法检验，多个率的比较用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1 MGMT基因启动子区甲基化率

    62例NSCLC患者中 ......

    http://www.100md.com/html/paper/2095-0616/2013/06/08-2.htm

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