三维能量多普勒超声检测宫颈病变血流与VEGF相关性研究(2)
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1.2 主要试剂与仪器
四维彩色多谱勒超声诊断仪(GE Voluson 8)；RIC 6-12-D高频三维腔内探头，频率为4～8 MHz；兔抗人VEGF多克隆抗体、SP免疫组化试剂盒(均购于北京中杉金桥生物技术有限公司)；Olympus生物显微镜。
1.3 研究方法
1.3.1 超声检测 使用GE Voluson E-8超声诊断仪，RIC 6-12-D高频三维腔内探头，对3组患者行经阴道宫颈三维超声血管成像，并应用VOCAL计算机软件检测血流指数(flow index，FI)、血管化指数(vascularization index，VI)及血管化血流指数(vascularization-flow index，VFI)数值。同时启动彩色多普勒能量(color power angiography，CPA)检查模式，对宫颈血管进行三维成像，充分显示所有血管的立体走行及分支。参考以往文献[3]将宫颈血管分为4级。上述超声检查及血流数据测量均由同一名操作者完成。最后对3组患者所获得的血流参数(FI、VI、VFI)进行比较，同时对36例宫颈癌组患者的血流参数测值与VEGF表达相关性进行分析比较。
1.3.2 免疫组化染色 选取所有病例宫颈部位组织切片各2张，经微波处理后，采用SP免疫组化法染色。用已知阳性片作为阳性对照，而PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。实验所有操作步骤均严格按照试剂盒说明书进行。
1.3.3 VEGF表达结果的判定 VEGF主要位于细胞质内，那么胞质内含有棕黄色颗粒即为阳性细胞。每张切片随机取10个具有代表性的高倍野，对免疫组化结果进行评估。分别对染色强度(无特异性染色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3)和阳性细胞百分率(阳性细胞数≤5%为0分，6%～35%为1分，36%～65%为2分，>65%为3分)进行计分，每张切片以两种计分相加的总分作为免疫组化评分：0分为阴性(-) ......
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