醛糖还原酶5’端(AC)n二核苷酸重复序列多态性与2型糖尿病合并冠心病的相关性(2)
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1.2 方法
1.2.1 生化指标测定 葡萄糖氧化酶法测定血糖，免疫比浊法测定HbA1C，CHOD-PAP法测定TC，GPO-PAP法测定TG，SPD法测定HDL-C，SUK法测定LDL-C。
1.2.2 DNA提取 用Solarbio人全血基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)从外周血白细胞中提取DNA，于-20℃保存。
1.2.3 聚合酶链反应(PCR) (AC)n引物参照文献[2]，Pr1(5’-GAATCTTAACATGCTCTGAACC-3’)Pr2(5’-GCCCAGCCCTATACCTAGT3’)，均由上海生物工程技术服务有限公司合成。PCR反应体系为25 μL，含DNA模板2 μL，上下游引物各1 μL，Tag酶0.25 μL，dNTP 0.25 μL，10×Buffer 2.5 μL，灭菌三蒸水18 μL。反应参数：94℃始变性5 min，94℃变性30 s，56.3℃退火30 s，72℃延伸2 min，共32个循环，最后于72℃孵育10 min，产物置于4℃保存。
1.2.4 方法 取5 μL PCR产物用2%琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统检测，证实扩增片段是否在预计132～144 kb之间。然后取5 μL PCR产物进行8%变性聚丙烯酰胺电泳，硝酸银染色，凝胶成像系统检测。选取基因型为纯合子的DNA样本 ......
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