HPLC法测定复方鲜竹沥液中水杨酸的含量
[摘要] 目的 建立复方鲜竹沥液中水杨酸的测定方法。 方法 以X-Bridge C18柱(4.6×250mm，5?m)为色谱柱；乙腈-0.5%三乙胺与0.5%磷酸的混合溶液(20︰80)为流动相，检测波长：210nm；流速：1.0mL/min。 结果 水杨酸在0.666～266.4μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.9999)，平均回收率为97.0%，RSD为0.8%(n=6)。 结论 本方法简便可行，重现性好，可用于复方鲜竹沥液的质量控制。
[关键词] 复方鲜竹沥液；HPLC；水杨酸；含量
[中图分类号] R927 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616(2013)17-126-02
复方鲜竹沥液是由鲜竹沥、鱼腥草、生半夏、生姜、枇杷叶、桔梗、薄荷素油等7味药组成，其中鲜竹沥具有清热化痰的功效。用于肺热咳嗽痰多，气喘胸闷，中风舌强，痰涎壅盛，小儿痰热惊风，是复方鲜竹沥液中的主药，控制鲜竹沥的含量能够有效控制复方鲜竹沥液的质量，由于现行的《中国药典》标准中未对复方鲜竹沥液的含量进行控制，据文献记载[1]，水杨酸是鲜竹沥中所含成分之一，因此，开展复方鲜竹沥液中水杨酸的含量测定具有一定的意义，可反映其质量情况[2]。
1 仪器与药品试剂
Waters 2695高效液相色谱仪系统，Mettler XS-205电子天平。水杨酸(批号100106-201104)为中国食品药品检定研究院提供。复方鲜竹沥液(江西南昌济生制药厂，批号为120118、111227、120415)。三乙胺(国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号：F20101020)。磷酸(国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号：20070911)。乙腈(美国，色谱纯，批号：DF728)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：X-Bridge C18(4.6×250mm，5?m)；流动相：乙腈-0.5%三乙胺与0.5%磷酸的混合溶液(20︰80)；检测波长：210nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：5μL。
在上述色谱条件下，水杨酸峰形对称，且复方鲜竹沥液自身成分对其检测无干扰。通过对不同厂家生产的不同批次复方鲜竹沥液进行高效液相色谱分析，均检测出水杨酸。对照品溶液、供试品溶液及空白样品溶液色谱图见图1。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的制备 取水杨酸对照品加水制成每毫升含0.26mg的溶液，作为对照品储备液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 线性关系的考察
分别精密吸取水杨酸对照品储备液适量，稀释成浓度为0.666、1.332、2.664、26.64、266.4μg/mL的对照品溶液。分别进样5?L，记录水杨酸的峰面积，以对照品的浓度为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。得其回归方程为y=43948x-20338，r=0.9999，表明水杨酸在0.666～266.4μg/mL范围内呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验
精密吸取浓度为2.664μg/mL的水杨酸对照品溶液，在上述色谱条件下连续进样6次，每次进样5μL，记录峰面积，RSD为1.0%(n=6)。表明精密度良好。
2.5 重复性试验
取同一批号样品适量共6份，在上述色谱条件下进行测定，结果水杨酸的平均含量为2.48μg/mL，RSD为0.5%(n=6)。
2.6 稳定性试验
取同一批号样品适量在上述色谱条件下分别在0、2、4、8、16、24h进行测定，结果水杨酸的平均含量2.47μg/mL，RSD为0.5%。
2.7 加样回收率试验
精密吸取已知含量的样品5mL，共6份，置10mL量瓶中，分别精密加入浓度为26.64μg/mL水杨酸对照品溶液0.5mL，按上述色谱条件进行测定。计算加样回收率，平均回收率为97.0%，RSD为0.8%(n=6)。
2.8 最低检测限
将水杨酸对照品储备液进行多次等倍稀释，当信噪比S/N为3时，最低检测限为0.18μg/mL。
2.9 样品测定
在上述色谱条件下，对该厂家生产的3批样品(批号120118、111227、12041)进行测定，结果含量分别为2.47μg/mL、2.71μg/mL、4.58μg/mL(n=3)。
3 讨论
本资料建立复方鲜竹沥液中水杨酸的含量测定，方法简单，易行，重现性好[3-4]。目前复方鲜竹沥液标准中没有对鲜竹沥进行鉴别或者含量测定，鲜竹沥是方中的主药。为了考察其质量情况，本资料通过建立鲜竹沥中含有的水杨酸的含量测定方法，可以反应其质量情况。对水杨酸的含量测定发现，其结果不是太稳定，有必要加强对原料药的控制。
检测波长进行考察，将水杨酸加水制成每毫升含0.26mg的对照品溶液，以水为空白，在200～400nm的波长范围内扫描紫外吸收光谱，结果水杨酸在210nm处有最大吸收，响应灵敏度较高，色谱峰形较好，且无杂质峰对其干扰，故选择此波长来检测[5]。
本资料在对色谱柱的选择上，曾采用XTerra C18(4.6×250mm，5μm)(沃特世公司)这一色谱柱，在本色谱条件下，结果水杨酸也能得到很好的分离[6-8]。
[参考文献]
[1] 陈奇云.鲜竹沥的鉴别与检查[J].中国医院药学杂志，1987，1(10)：42.
[2] 马莉，唐健元，李祖伦，等.板蓝根提取物中总有机酸和水杨酸含量测定方法研究[J].中国中药杂志，2006，31(10)：804-806.
[3] 周蓓瀛，李楠，张钢平，等.高效液相色谱法测定水杨酸醇溶液中水杨酸含量[J].中国药业，2009，18(16)：38-39.
[4] 吴小红，彭中笑.HPLC法同时测定复方水杨酸搽剂中三组分的含量[J].中国药品标准，2008，9(5)：384-386.
[5] 陈中建，陈松，王秀丽.用HPLC法同时测定水杨酸间苯二酚火棉胶中水杨酸和间苯二酚含量[J].药学服务与研究，2010，10(2)：151-153.
[6] 杨慧，袁京群，俞佳，等.高效毛细管电泳法同时测定复方水杨酸洗剂中水杨酸和间苯二酚的含量[J].医药导报，2006，25(10)：1068-1069.
[7] 王烽.HPLC法测定复方醋酸氟轻松酊中水杨酸和间苯二酚的含量[J].中国医药科学，2012，2(19)：92-93.
[8] 钱木水，韩鹏，叶兴法.顽癣净质量标准的研究[J].中国医药导报，2009，6(8)：54-55，66.
(收稿日期：2013-07-19), http://www.100md.com(金卓)
[关键词] 复方鲜竹沥液；HPLC；水杨酸；含量
[中图分类号] R927 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616(2013)17-126-02
复方鲜竹沥液是由鲜竹沥、鱼腥草、生半夏、生姜、枇杷叶、桔梗、薄荷素油等7味药组成，其中鲜竹沥具有清热化痰的功效。用于肺热咳嗽痰多，气喘胸闷，中风舌强，痰涎壅盛，小儿痰热惊风，是复方鲜竹沥液中的主药，控制鲜竹沥的含量能够有效控制复方鲜竹沥液的质量，由于现行的《中国药典》标准中未对复方鲜竹沥液的含量进行控制，据文献记载[1]，水杨酸是鲜竹沥中所含成分之一，因此，开展复方鲜竹沥液中水杨酸的含量测定具有一定的意义，可反映其质量情况[2]。
1 仪器与药品试剂
Waters 2695高效液相色谱仪系统，Mettler XS-205电子天平。水杨酸(批号100106-201104)为中国食品药品检定研究院提供。复方鲜竹沥液(江西南昌济生制药厂，批号为120118、111227、120415)。三乙胺(国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号：F20101020)。磷酸(国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号：20070911)。乙腈(美国，色谱纯，批号：DF728)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：X-Bridge C18(4.6×250mm，5?m)；流动相：乙腈-0.5%三乙胺与0.5%磷酸的混合溶液(20︰80)；检测波长：210nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：5μL。
在上述色谱条件下，水杨酸峰形对称，且复方鲜竹沥液自身成分对其检测无干扰。通过对不同厂家生产的不同批次复方鲜竹沥液进行高效液相色谱分析，均检测出水杨酸。对照品溶液、供试品溶液及空白样品溶液色谱图见图1。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的制备 取水杨酸对照品加水制成每毫升含0.26mg的溶液，作为对照品储备液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 线性关系的考察
分别精密吸取水杨酸对照品储备液适量，稀释成浓度为0.666、1.332、2.664、26.64、266.4μg/mL的对照品溶液。分别进样5?L，记录水杨酸的峰面积，以对照品的浓度为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。得其回归方程为y=43948x-20338，r=0.9999，表明水杨酸在0.666～266.4μg/mL范围内呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验
精密吸取浓度为2.664μg/mL的水杨酸对照品溶液，在上述色谱条件下连续进样6次，每次进样5μL，记录峰面积，RSD为1.0%(n=6)。表明精密度良好。
2.5 重复性试验
取同一批号样品适量共6份，在上述色谱条件下进行测定，结果水杨酸的平均含量为2.48μg/mL，RSD为0.5%(n=6)。
2.6 稳定性试验
取同一批号样品适量在上述色谱条件下分别在0、2、4、8、16、24h进行测定，结果水杨酸的平均含量2.47μg/mL，RSD为0.5%。
2.7 加样回收率试验
精密吸取已知含量的样品5mL，共6份，置10mL量瓶中，分别精密加入浓度为26.64μg/mL水杨酸对照品溶液0.5mL，按上述色谱条件进行测定。计算加样回收率，平均回收率为97.0%，RSD为0.8%(n=6)。
2.8 最低检测限
将水杨酸对照品储备液进行多次等倍稀释，当信噪比S/N为3时，最低检测限为0.18μg/mL。
2.9 样品测定
在上述色谱条件下，对该厂家生产的3批样品(批号120118、111227、12041)进行测定，结果含量分别为2.47μg/mL、2.71μg/mL、4.58μg/mL(n=3)。
3 讨论
本资料建立复方鲜竹沥液中水杨酸的含量测定，方法简单，易行，重现性好[3-4]。目前复方鲜竹沥液标准中没有对鲜竹沥进行鉴别或者含量测定，鲜竹沥是方中的主药。为了考察其质量情况，本资料通过建立鲜竹沥中含有的水杨酸的含量测定方法，可以反应其质量情况。对水杨酸的含量测定发现，其结果不是太稳定，有必要加强对原料药的控制。
检测波长进行考察，将水杨酸加水制成每毫升含0.26mg的对照品溶液，以水为空白，在200～400nm的波长范围内扫描紫外吸收光谱，结果水杨酸在210nm处有最大吸收，响应灵敏度较高，色谱峰形较好，且无杂质峰对其干扰，故选择此波长来检测[5]。
本资料在对色谱柱的选择上，曾采用XTerra C18(4.6×250mm，5μm)(沃特世公司)这一色谱柱，在本色谱条件下，结果水杨酸也能得到很好的分离[6-8]。
[参考文献]
[1] 陈奇云.鲜竹沥的鉴别与检查[J].中国医院药学杂志，1987，1(10)：42.
[2] 马莉，唐健元，李祖伦，等.板蓝根提取物中总有机酸和水杨酸含量测定方法研究[J].中国中药杂志，2006，31(10)：804-806.
[3] 周蓓瀛，李楠，张钢平，等.高效液相色谱法测定水杨酸醇溶液中水杨酸含量[J].中国药业，2009，18(16)：38-39.
[4] 吴小红，彭中笑.HPLC法同时测定复方水杨酸搽剂中三组分的含量[J].中国药品标准，2008，9(5)：384-386.
[5] 陈中建，陈松，王秀丽.用HPLC法同时测定水杨酸间苯二酚火棉胶中水杨酸和间苯二酚含量[J].药学服务与研究，2010，10(2)：151-153.
[6] 杨慧，袁京群，俞佳，等.高效毛细管电泳法同时测定复方水杨酸洗剂中水杨酸和间苯二酚的含量[J].医药导报，2006，25(10)：1068-1069.
[7] 王烽.HPLC法测定复方醋酸氟轻松酊中水杨酸和间苯二酚的含量[J].中国医药科学，2012，2(19)：92-93.
[8] 钱木水，韩鹏，叶兴法.顽癣净质量标准的研究[J].中国医药导报，2009，6(8)：54-55，66.
(收稿日期：2013-07-19), http://www.100md.com(金卓)