杆菌肽脂质体的制备及其药物含量测定(2)
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2.2 脂质体中杆菌肽的含量测定
2.2.1 溶液的配制
2.2.1.1 对照品溶液 取杆菌肽对照品约20mg(杆菌肽效价61?g/mg)，精密称量，置10mL棕色容量瓶中，用三蒸水溶解并稀释至刻度，摇匀，过0.45?m微孔滤膜，取续滤液作对照品溶液。
2.2.1.2 供试品溶液 离心样品溶液：精密吸取杆菌肽脂质体溶液0.1mL于离心管中，加三蒸水至1mL，在4℃以转速13000r/min离心90min，取上清液，用来测定脂质体溶液中游离药物的含量。
未离心样品溶液：精密吸取杆菌肽脂质体溶液0.1mL，加20?L 5% TritonX-100溶液进行破乳，用三蒸水稀释至1mL，摇匀，即得，用来测定脂质体中总杆菌肽的含量。
2.2.1.3 阴性对照溶液 除不加杆菌肽外，按2.1项下的方法操作，制备不含杆菌肽的空白脂质体，并以2.2.1.2项下“未离心样品溶液”的方法制备为阴性对照溶液。
2.2.2 色谱条件 色谱柱：Diamonsil-C18色谱柱(150mm× 4.6mm，5?m)；流动相：pH 6.0的磷酸盐缓冲液-甲醇(60：40)；柱温：25℃；检测波长：254nm；流速：1mL/min。理论塔板数以杆菌他吸收峰计算，应不低于2000。
精密吸取杆菌肽对照品溶液、杆菌肽脂质体(未离心样品溶液)和阴性对照溶液各20?L，进样，测定，结果见图1。结果表明，空白脂质体对杆菌肽的测定无干扰。
A
B
C
图1 杆菌肽对照品(A)、杆菌肽脂质体样品(B)、阴性对照(C)的HPLC图
2.2.3 线性关系考察 精密吸取对照品溶液7份，稀释成浓度分别为3.05、6.10、24.40、36.60、48.80、61.00、91.50?g/mL溶液，分别取20?L依次进样，测定。以峰面积积分值(y)对杆菌肽进样量(X ......
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