鲍曼不动杆菌耐药基因及插入序列遗传标记的研究(2)
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1.3.2 药物敏感试验 采用K-B纸片扩散法测定鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性。参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)2010年的标准判断结果。12种抗菌药物分别为头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、头孢西丁、亚胺培南、美洛培南、氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、阿米卡星、庆大霉素、环丙沙星和四环素。药敏试验质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922。
1.3.3 制备DNA 将经过全自动细菌鉴定药敏分析系统鉴定后的鲍曼不动杆菌转入血平板，经24h培养后，挑纯培养菌落置入0.5mL离心管内(内预置200ng/mL蛋白酶K溶液200μL)，充分震荡混匀后进行2h水浴(56℃)，然后放入95℃水浴进行10min，离心半径15000r/min进行30s离心，获得的上清液作为基因检测的DNA模板液，放入-20℃冰箱内进行保存备用。
1.3.4 随机引物PCR扩增选用随机引物ERICIR(5’-ATGTA-AGCTCCTGGGGATTCAC-3’)和ERIC2(5’-AAGTAAGTGACTGGGGTGAGCG-3’)进行PCR反应扩增，在PCR反应扩增完成后在1.5%的琼脂糖凝胶中放入PCR产物，150V电泳20min后用凝胶成像仪观察DNA条带的分布并分析基因型。
1.3.5 扩增引物 应用上海生工生物工程有限公司合成的基因扩增引物[5]，各种靶基因引物序列和目的产物长度见表1。
1.3.6 基因检测 均为PCR法检测。PCR扩增体系为：每反应体系Pl、P2引物各lμmol/L ......
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