HSP90和P23蛋白量和细胞亚定位在多发性骨髓瘤患者中的临床价值(2)
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参见附件。
1.3 疗效判断标准
按国内多发性骨髓瘤疗效判定指标及标准[3]，达到完全缓解、部分缓解和进步者为糖皮质激素敏感，无效者为糖皮质激素抵抗。
1.4 Western Blot检测蛋白表达
收集5×106个细胞，用蛋白裂解液裂解细胞后，离心去细胞碎片，取上清液，经Bradford分析方法定量细胞总蛋白，各组取60mg总蛋白进行12% SDS-PAGE，并转印到PVDF膜上，用1%牛血清白蛋白(BSA)和0.05% Tween20封闭非特异性抗原后，一抗4℃温育过夜。次日TBST洗膜后，二抗羊抗小鼠IgG-HRP 1∶5000稀释，37℃温育1h，TBST洗膜后ECL荧光显色。蛋白质条带用扫描仪进行扫描，以GAPDH条带作为参照Imagaquent5.1软件对蛋白质条带灰度进行相对定量分析。以目的蛋白条带与GAPDH灰度比值表示蛋白相对表达水平(重复3次)。
1.5 ELISA法检测MM患者血清HSP90和P23蛋白质含量
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。严格按试剂盒说明操作，简述如下，激活：首先标本激活；加样：酶标板各孔加入待测已激活血清100μL，混匀后置37℃40min，洗板；加一抗：用洗涤液将反应板充分洗涤4～6次，在滤纸上印干，各孔加入蒸馏水和第一抗体工作液各50μL，充分混匀后置37℃20min，洗板同前；加二抗：各孔加入酶标工作液100μL，置37℃暗处反应10min，洗板同前；显色：各孔加入底物工作液100μL，置37℃暗处反应15min；终止反应：各孔加入100μL终止液混匀，30min内用酶标仪在450nm处测吸光值 ......
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