真核表达载体pEGFP—N1—kin17的构建及其在Zmpste24—/—小鼠胚胎成纤维细胞内的表达(3)
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参见附件。
2.2 荧光显微镜观察 kin17在MEFs中定位
MEFs是原代细胞，pEGFP-N1和pEGFP-N1-kin17分别转染野生型和Zmpste24-/- MEFs，荧光显微镜观察细胞，见图2。其中，第1列为检测绿色荧光获得的图像。在野生型和突变型两种细胞中GFP空载体转染均可见GFP蛋的表达。无论是在野生型还是突变型，GFP单独转染对照细胞中均可见GFP分布于整个细胞中，包括细胞核与细胞浆。而GFP偶联Kin17的转染的细胞中，GFP荧光信号则绝大部分在细胞核内呈均匀分散态，并在细胞核中出现较多密度较高的聚集。第2列为UV通道检测DAPI染细胞核图像，细胞核清晰可见，形态正常，均匀分布。第3列为第1和第2列图像的叠加。
3 讨论
Lmna基因通过不同的剪接过程表达lamin A/C蛋白(A型核纤层蛋白)。A型核纤层蛋白Lamin A/C与DNA的复制，转录，翻译以及表观遗传学修饰等事件密切关联[6]。关于kin17的研究发现并不多，目前认为，kin17与DNA复制起始点密切结合；与非复制起始点比较，kin17与复制起始点DNA的结合力强10倍。kin17通过与T抗原相互作用，结合于SV40的DNA复制起点。由此可见，kin17在DNA复制过程中与DNA复制起始关系更为密切。免疫电镜也证实kin17与DNA复制相关蛋白质RPA ......
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