姬松茸粗多糖对K562细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制探讨(2)
1.5 用EMSA法检测K562细胞的核因子NF-KB的活性核蛋白的提取:各组浓度的姬松茸粗多糖在作用K562细胞48h以后,收获细胞,使用核蛋白抽提试剂盒来提取细胞核蛋白,用BCA试剂盒进行蛋白的定量,保存在-80℃下备用。提取核蛋白提取物2μL,和γ-P32标记的NF-k寡聚核苷酸探针进行结合,并用聚丙烯胺凝胶电泳来分离NF-kB的探针复合物,接着电泳2h,然后在-70℃自显影72h。NF-kB活性检测的结果应用Bio-Rad公司Gel Doc凝胶成像系统对膜片进行扫描,同时使用GELpro3.0软件对其滞后带灰度进行分析。
1.6 统计学处理
使用SPSS11.5统计包来进行统计分析,计量资料用()表示,多组间比较用方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 姬松茸粗多糖对K562细胞周期的影响
结果显示,处于G0/G1期的细胞明显增多,处于S期的细胞减少,而G2/M期的细胞则无明显变化。说明姬松茸粗多糖作用于K562细胞后,可以把细胞周期阻滞于G0/G1期,减少细胞进入S期,从而抑制细胞的增殖 ......
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