红细胞溶血试验检测化妆品眼刺激性的初步研究(2)
试验用家兔来自广州市药品检验所动物房,经检疫后选用健康成年白色家兔,性别不限,雌性不孕。1.2 主要仪器及试剂
主要仪器:日立U-3900紫外分光光度计,低温高速28RS离心机(Biofuge),电子天平AB204-S,六孔水浴TW12。
主要试剂:十二烷基硫酸钠(SDS),广州学友生物科技有限公司;二甲亚砜(DMSO),美国AR公司;草酸钾,广州化学试剂厂。
1.3 实验方法
1.3.1 红细胞溶血试验 红细胞悬液的制备:健康家兔心脏取血7mL,加2%草酸钾溶液1mL,制备成新鲜抗凝兔血,加PBS 10mL稀释,4℃冰箱保存备用。
样品悬液的制备:根据预实验,选择合适的终浓度,配制样品系列溶液。每种样品均设立5个试验剂量。首选PBS为溶剂,对于不溶于PBS的样品选用DMSO为溶剂(终浓度≤0.5%)。必须保证各稀释样品悬液充分混匀。
溶血及蛋白变性测定:样品组每个浓度2支具塞试管,每管加入样品悬液10mL;阴性对照组2支具塞试管,每管加入PBS 10mL;阳性对照组2支具塞试管 ......
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