1.2 主要仪器和试剂

    为了保证试验的顺利完成，采用的主要仪器和试剂主要由石蜡切片机、扫描电镜、光学显微镜、电热恒温鼓风干燥箱、恒温水浴箱、Trizol试剂等，相关试剂和仪器厂家如下，见表1。

    1.3 方法

    采用免疫组织化学法测定两组组织CD133表达情况，取制备的乳腺癌组织和癌旁组织，采用10.0%甲醛液固定，石蜡包埋，制备4um厚连续切片。将切片放置在烘烤箱(60℃)下进行1h烘烤，脱蜡至水，采用PH为7.2～7.4PBS缓冲液3次清洗，每次3min，采用浓度为3%H2O2溶液放在室温下进行20min孵育，将组织中内源性过氧化物酶消除，采用PBS进行3次冲洗，每次3min，加入1：10普通山羊血清进行15min下孵育，减少非特异性抗原抗体结合。去除组织切片上的血清，滴加一抗(CD133单克隆抗体)，4℃下过夜，室温下放置1h，采用PBS进行3次清洗，每次3min，加入生物素标记的二抗，孵育30min，温度为37℃。加入辣根过氧化物酶，孵育30min，温度为37℃，采用PBS进行3次清洗，每次3min，DAB显色，苏木精复染8-10s，中性树胶封片。根据阳性细胞数和染色强度进行半定量测定，在200倍光镜下每张切片随机选择5个视野，每个视野测定3次后取平均值[8-9]。

    1.4 评定方法

    随机选择10个视野 ......