周 强 宋宇峰 冯红超

    1.广东省清远市人民医院口腔科，广东清远 511518；2.贵州医科大学附属医院口腔科，贵州贵阳 550004；3.贵州省贵阳市口腔医院颌面外科，贵州贵阳 550002

    酸性微环境对舌鳞癌中单核/巨噬细胞表型影响的实验研究

    周 强1宋宇峰2冯红超3

    1.广东省清远市人民医院口腔科，广东清远 511518；2.贵州医科大学附属医院口腔科，贵州贵阳 550004；3.贵州省贵阳市口腔医院颌面外科，贵州贵阳 550002

    目的以舌鳞癌为研究对象，研究探讨肿瘤组织酸性微环境对单核/巨噬细胞的表型变化和功能的影响。方法采用密度梯度离心法从健康人的外周血分离单核/巨噬细胞；从中国科学院细胞库购买人舌鳞癌细胞株(Tca-8113)，将两种细胞分别在酸性微环境(pH6.5/6.8/7.0)和常规环境下(pH7.2)单独及混合培养，以常规环境下培养作为对照，4h后ELISA检测细胞培养上清液中Arg和iNOS的水平变化。结果在酸性微环境下，单核/巨噬细胞单独培养和与舌鳞癌细胞混合培养的iNOS分泌明显减少和Arg分泌明显增加，均高于常规环境下单核/巨噬细胞单独培养和与舌鳞癌细胞混合培养，两者差异有统计学意义(P<0.05)；在酸性微环境及常规环境中，舌鳞癌细胞单独培养上清液中，Arg和iNOS无明显变化，两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论舌鳞癌酸性微环境中单核/巨噬细胞的表型偏向于M2型，即单核/巨噬细胞在舌癌酸性环境中可能通过自身表型的变化，分泌细胞因子下调免疫应答，参与了肿瘤的的生长、侵袭和转移等。

    单核/巨噬细胞；口腔鳞状细胞癌；酸性微环境；表型鉴定

    研究表明肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages，TAMs)参与了肿瘤发生、生长、侵袭和转移的过程，活化的巨噬细胞在免疫应答中也发挥重要作用[1]。舌鳞癌是发生在口腔黏膜的最常见的恶性肿瘤，浸润于其中的巨噬细胞，在体内外不同的微环境影响下，表现出明显的功能差异[2-3]。本实验通过体外模拟舌鳞癌组织中的酸性微环境及正常环境，检测其中Arg和iNos的水平变化来研究肿瘤组织酸性微环境对单核/巨噬细胞的表型变化和功能的影响。

    1 材料与方法

    1.1 一般材料

    主要试剂：人淋巴细胞分离液(天津市灏阳生物制品科技有限责任公司)；2%明胶溶液；5mmol/L EDTA；人iNOS及Arg ELISA试剂盒(上海西唐生物科技有限公司产品)；鼠抗人CD14单克隆抗体(上海雷浩)、PBS液(武汉博士德公司)；Hanks液 ......