酸性微环境对舌鳞癌中单核/巨噬细胞表型影响的实验研究
培养箱,1材料与方法,1一般材料,2试验方法,3统计学处理,2结果,1获取的单核,巨噬细胞流式细胞,2人舌鳞癌细Tca-8113,3ELISA法检测iNOS的含量,4ELISA法检测Arg的含量,3讨论
周 强 宋宇峰 冯红超1.广东省清远市人民医院口腔科,广东清远 511518;2.贵州医科大学附属医院口腔科,贵州贵阳 550004;3.贵州省贵阳市口腔医院颌面外科,贵州贵阳 550002
酸性微环境对舌鳞癌中单核/巨噬细胞表型影响的实验研究
周 强1宋宇峰2冯红超3
1.广东省清远市人民医院口腔科,广东清远 511518;2.贵州医科大学附属医院口腔科,贵州贵阳 550004;3.贵州省贵阳市口腔医院颌面外科,贵州贵阳 550002
目的以舌鳞癌为研究对象,研究探讨肿瘤组织酸性微环境对单核/巨噬细胞的表型变化和功能的影响。方法采用密度梯度离心法从健康人的外周血分离单核/巨噬细胞;从中国科学院细胞库购买人舌鳞癌细胞株(Tca-8113),将两种细胞分别在酸性微环境(pH6.5/6.8/7.0)和常规环境下(pH7.2)单独及混合培养,以常规环境下培养作为对照,4h后ELISA检测细胞培养上清液中Arg和iNOS的水平变化。结果在酸性微环境下,单核/巨噬细胞单独培养和与舌鳞癌细胞混合培养的iNOS分泌明显减少和Arg分泌明显增加,均高于常规环境下单核/巨噬细胞单独培养和与舌鳞癌细胞混合培养,两者差异有统计学意义(P<0.05);在酸性微环境及常规环境中,舌鳞癌细胞单独培养上清液中,Arg和iNOS无明显变化,两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论舌鳞癌酸性微环境中单核/巨噬细胞的表型偏向于M2型,即单核/巨噬细胞在舌癌酸性环境中可能通过自身表型的变化,分泌细胞因子下调免疫应答,参与了肿瘤的的生长、侵袭和转移等。
单核/巨噬细胞;口腔鳞状细胞癌;酸性微环境;表型鉴定
研究表明肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)参与了肿瘤发生、生长、侵袭和转移的过程,活化的巨噬细胞在免疫应答中也发挥重要作用[1]。舌鳞癌是发生在口腔黏膜的最常见的恶性肿瘤,浸润于其中的巨噬细胞,在体内外不同的微环境影响下,表现出明显的功能差异[2-3]。本实验通过体外模拟舌鳞癌组织中的酸性微环境及正常环境,检测其中Arg和iNos的水平变化来研究肿瘤组织酸性微环境对单核/巨噬细胞的表型变化和功能的影响。
1 材料与方法
1.1 一般材料
主要试剂:人淋巴细胞分离液(天津市灏阳生物制品科技有限责任公司);2%明胶溶液;5mmol/L EDTA;人iNOS及Arg ELISA试剂盒(上海西唐生物科技有限公司产品);鼠抗人CD14单克隆抗体(上海雷浩)、PBS液(武汉博士德公司);Hanks液 ......
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