张 鹏 吴翠莹 曾 旭 刘 宁 张鹏飞 戴宜武 秦家振

    解放军陆军总医院，北京 100700

    随着世界各国经济水平的发展，交通工具与城市建设飞速发展，同时带来脊髓损伤的发生率呈现逐年增高的趋势。脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)是由于外界直接或间接因素导致脊髓损伤，在损害的相应节段出现各种运动、感觉和括约肌功能障碍，肌张力异常及病理反射等的相应改变，不仅给患者本人带来身体和心理的严重伤害，还对整个社会造成巨大的经济负担。尤其是慢性脊髓损伤，由于其治疗效果较差，备受各国研究人员的重视。

    近年来，随着干细胞技术的发展，干细胞移植治疗 SCI 已成为热点，骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells， BMSCs)为来源于中胚层间充质的成体干细胞，具有易于获取，无伦理学争议，增殖能力较强，易于体内外扩增等特性，除此之外，MSCs还具有免疫调节，促进神经轴突和血管再生等作用[1-2]。然而，间充质干细胞移植也有诸多不利：如无法长期存活、存在部位无法固定等。而间充质干细胞的条件培养基(BMSC-CM)因含丰富的细胞因子，对多种疾病均有积极的治疗效果[3-4]。

    本实验通过观察动物行为学并进行免疫组化学检测得知，BMSC-CM能够在较大程度上影响慢性脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达[5]。并对大鼠慢性脊髓损伤后的功能恢复具有重要作用，现报道如下。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料

    随机选取脊髓神经损伤研究实验室84只雄性Wistar大鼠，两组大鼠均为慢性脊髓损伤，依据大鼠的受伤情况并运用随机数字表法将其分为对照组与观察组。对照组与观察组大鼠数量分别为42只，样本来源于受伤后 1、4、11、21、35、60、90d 等不同时期。

    1.2 方法

    (1)制作慢性压迫性脊髓损伤模型。手术前将大鼠固定在手术架上，并对其注射45mL的戊巴比妥钠麻醉药剂就行麻醉。以T13为中心切口，将大鼠受伤的脊髓进行切除，并将3mm长、0.5mm螺距的塑料钉嵌入大鼠的脊髓，使其脊髓受到10%的压力，之后每隔一天便重复此操作，直至受压程度达到40%，最大的受压程度可达到50%。

    (2)BMSCs的培养及BMSC-CM的收集。BMSCs的原代分离培养：使用2%戊巴比妥钠(批准文号：国药准字H31021725，2010-08-17，生产单位：上海新亚药业有限公司)麻醉大鼠，无菌条件取股骨及胫骨 ......