邱文娜 饶 玲 王永智 方朝东 李 磊

    江苏省泰州医药高新技术产业园区疫苗工程中心，江苏泰州 225300

    狂犬病是由狂犬病毒所致的人畜共患急性传染病，流行性广，病死率100%，有效预防该病的措施是接种狂犬病疫苗[1]。目前，上市的狂犬疫苗有两种剂型，冻干粉针剂因技术含量高、易于保存、免疫反应轻等特点，将逐步成为市场主流。水分含量是冻干粉针剂疫苗稳定性相关的一个重要参数，在日常质检过程中诸多因素会影响该检测结果的准确性[2-6]。

    本实验室该项检测项目于2012年获得CNAS认可，曾两次参加CNAS组织的测量审核、能力验证，且结果均为满意。本文利用瑞士万通870型水分测定仪测定冻干人用狂犬病疫苗中的水分含量，根据日常检测经验对影响测定结果的四大因素进行不确定度评定，该因素包括测量重复性、卡尔费休试液滴定度、卡尔费休试液滴定体积、称样量[7-10]。依据不确定评定方法，建立不确定度分析的数学模型， 逐步考察各不确定度分量，找出分析过程中的关键点，为日常检测数据的准确性和可靠性提供依据[11-15]。

    1 材料与方法

    1.1 样品

    冻干人用狂犬病疫苗，由中心内疫苗研发企业提供。

    1.2 主要试剂及仪器

    无水甲醇(分析纯，含水量<0.1%)；卡尔费休试剂(批号 SZBD0490V，Sigma Fluka)；标定用水；电子天平(Sartorius BSA224S-CW)；卡尔-费休水分测定仪(瑞士万通KF 870型)；微量注射器、药匙。凡与样品或费休氏试液直接接触的物品，如称量勺、玻璃器皿、橡皮塞均应在80℃干烤2h，取出置干燥器内冷却20min备用。

    1.3 环境要求

    环境湿度对检测结果影响较大，且卡尔费休试液具有吸水性，因此水分检测实验室湿度需低于50%，仪器干燥用分子筛需状态良好，与样品直接接触的称量纸、称量勺、捣碎工具均需80℃干燥。

    1.4 检测方法

    1.4.1 滴定杯微环境的平衡 加入50mL无水甲醇至滴定杯中，启动仪器平衡模式，消除滴定杯中存在多余水分干扰，等待仪器显示conditioning ok，即漂移值小于20μL/S时，即可开始标定。

    1.4.2 卡尔费休溶液的标定 选择Titer标定模式，使用尖头微量注射器吸取约20mL标定用水，注意排除气泡，精密称定注射器和水样质量并做好记录，选择仪器进样键，快速加入水样至滴定杯中，再次精密称定注射器质量 ......