余展旺 吴伟东 罗达敏

    深圳技师学院应用生物系，广东深圳 518116

    盐酸维拉帕米缓释片用于原发性高血压，化学名称：α-[3-][2-(3，4-二甲氧苯基)乙基]甲氨基]丙基] -3，4-二甲氧基-α-异丙基苯乙腈盐酸盐。分子式：C27H38N2O4·HCl。盐酸维拉帕米为钙离子拮抗剂，钙离子拮抗剂又称钙通道阻滞剂(CCB)，通过调节心肌传导细胞、心肌收缩细胞以及动脉血管平滑肌细胞细胞膜上的钙离子内流，发挥其药理学作用，但不改变血清钙浓度。该药是我国高血压患者最常使用的一类降压药[1]，《中国药典》2015年版二部收载有该品种[2]。根据《中国药典》2015年版四部相关规定，盐酸维拉帕米缓释片应进行需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定及大肠埃希菌的检查[3]。在建立药品的微生物限度检验方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合该产品的微生物限度检查，从而保证所建立检验方法的科学性和检验结果的准确性。本品微生物限度检查方法学的建立如下。

    1 材料与方法

    1.1 试验仪器

    生化培养箱(上海一恒科学仪器有限公司)，湿热灭菌柜(山东新华医疗器械股份有限公司)，生物安全柜(山东博科生物产业有限公司)，干热灭菌柜(山东新华医疗器械股份有限公司)，电子天平 (赛多利斯科学仪器北京有限公司)；匀浆仪 (上海炳隆机电设备有限公司)。

    1.2 试药

    盐酸维拉帕米缓释片(批号20151201、20151202、20151203)，硫氰酸铵。

    1.3 培养基

    胰酪大豆胨琼脂培养基；沙氏葡萄糖琼脂培养基；麦康凯液体培养基；胰酪大豆胨液体培养基；pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液；麦康凯琼脂培养基。

    1.4 验证用菌株

    铜绿假单胞菌 [CMCC(B)10104]； 金黄色葡萄球菌 [CMCC(B)26003]； 枯草芽孢杆 菌 [CMCC(B)635011]；白色念珠菌 [CMCC(B)98001]； 黑曲霉[CMCC(B)98003]， 中国食品药品检定研究院提供。

    1.5 试验菌悬液的制备[2]

    取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3～5mL含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。然后 ......