郑仕杰 周敬群 杨维华 黄 迪 蔡金丹 戴秋婷 吕建峰

    三峡大学附属仁和医院心血管内科，湖北宜昌 443000

    冠心病发病的主要原因之一是血管内膜损伤后的血管再狭窄。近年来，随着血管介入治疗的广泛开展，血管损伤后再狭窄问题逐渐增多。有研究结果显示，在血管介入治疗的患者中，术后发生血管内再狭窄几率可达30%[1]。但目前有关血管损伤后再狭窄的具体病理机制暂不明确。既往研究认为，新生内膜的修复来源于血管损伤后的中膜平滑肌细胞和细胞外基质的参与，这是引起血管再狭窄的重要原因[2-3]。另有研究显示，血管损伤时其外膜的成纤维细胞可以分化为肌成纤维细胞，参与血管损伤后内膜的增生[4]。但也有文献报道，新生内膜的平滑肌细胞并非完全来自血管中膜和(或)外膜，BMSCs 可以通过分化参与损伤血管的新生内膜形成[5]。

    同时研究发现，TGF-β1/Smad 信号通路与心血管疾病密切相关，在动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗死等疾病的发病中具有重要作用，但具体分子机制尚不明确。本实验旨在研究血管损伤后是否存在TGF-β1/Smad 信号通路的激活，以及BMSCs 参与血管损伤后重构的相关性研究。

    1 材料与方法

    1.1 材料与分组

    选取健康雄性SD 大鼠48 只(350 ～450g，三峡大学动物实验中心提供)，建立球囊导管损伤右侧颈总动脉损伤模型，按完全随机对照原则分6 组，每组8 只，即：对照组、实验0h、3d、7d、14d、21d 组。

    1.2 主要试剂及仪器

    DAB 显色试剂盒(武汉博士德生物公司)、胎牛血清(Gibco 生物工程公司)、低糖DMEM(Gibco 生物工程公司)、兔抗人CD33(北京中衫公司)、兔抗人CD34(北京中衫公司)、兔抗人TGF-β1(浓度1 ∶200)(北京中衫公司)、兔抗人p-Smad2/3(浓度1 ∶50)(北京中衫公司)、兔抗人Smad2/3(浓度1 ∶50)(北京中衫公司)、兔抗人Nestin(浓度1 ∶600)Gibco 生物工程公司)、蛋白电泳条Marker、Western Blot 检测抗体(Gibco 生物工程公司)。PTCA 球囊导管、球囊导管压力泵、剪刀、镊子、手术缝合线、圆针、超净工作及操作台、低温高速离心机、奥林巴斯显微镜及图像采集系统、电泳仪、石蜡包埋机等 ......