燕小宁

    1.山西中医药大学第四临床学院，山西太原 030619；2.山西省中西医结合医院，山西太原 030001

    2 型糖尿病为常见的高发内分泌疾病，其发病机制复杂，至今尚未完全明确。近年来，大量研究证实[1]，2 型糖尿病患者机体存在以巨噬细胞浸润增加为主要特征的胰岛炎症，且对胰岛β 细胞正常功能造成极大影响，进而参与2 型糖尿病的发病及发展，并发挥着重要的作用。临床研究发现[2-3]，活性维生素D 可作为内分泌激素有效调节骨代谢和钙磷平衡，同时还具有免疫调节功能，延缓和防治自身免疫性糖尿病的疾病进展，同时对胰岛组织的炎症反应水平具有明显的抑制作用，可有效改善胰岛组织损伤及淋巴细胞浸润进展；为进一步阐明活性维生素D 拮抗糖尿病炎症反应作用及其作用机制，本研究采用活性维生素D 在体外作用于大鼠胰岛β 细胞RINm 细胞株，观察其对细胞因子引起的胰岛β 细胞凋亡及其受损的胰岛素分泌的影响，并探讨可能的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    大鼠胰岛β 细胞RINm 细胞株购自美国ATCC 公司；干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)、白细胞介素1β(interleukin-1β，IL-1β)均购自美国Thermo 公司，活性维生素 D 购自上海罗氏制药有限公司(批号：J20100056)；青链霉素混合液、高糖改良杜氏伊格尔培养基(dulbecco's modified eagle medium，DMEM)培养基、磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline，PBS)、胰蛋白酶消化液、胎牛血清(CAS：10099-141)购自美国Gibco 公司，4，5-二甲基噻唑-2(MTT)试剂、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)购自碧云天生物有限公司；白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、IFN-γ 酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒均购置美国R&D 公司，一氧化氮(NO)测定试剂盒(酶法)购置南京建成生物研究所。

    1.2 方法

    (1)细胞培养：RINm 细胞培养于1%青链霉素、10%胎牛血清的高糖DMEM 培养液，在37℃、5% CO2培养箱培养，24h 换液1 次；待细胞增殖至80%融合时，采用0.25%胰蛋白酶消化液消化3min 后 ......